氯硝柳胺促进SKOV3细胞凋亡及其机制研究

发布时间：2017-05-16 16:25

  本文关键词：氯硝柳胺促进SKOV3细胞凋亡及其机制研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:通过体外细胞培养,观察肠驱虫药氯硝柳胺(Niclosamide)对SKOV3细胞的生长抑制作用,并探讨其抑制SKOV3细胞存活的内在分子机制。方法:1、MTT法检测不同浓度氯硝柳胺对SKOV3细胞的生长抑制作用并筛选出适宜药物浓度(4umol/L和8umol/L)进行后续实验。2、MTT法检测氯硝柳胺联合临床一线化疗药物对SKOV3细胞的毒性作用。3、流式细胞术(FCM)测定氯硝柳胺及氯硝柳胺联合化疗药物对SKOV3细胞凋亡作用的影响。4、实验分为对照组、4u M Niclosamide组、8u M Niclosamide组、化疗药物组、4u M Niclosamide+化疗药物组及8u M Niclosamide+化疗药物组;RT-PCR法检测不同实验组Wnt/β-catenn信号通路中β-连环蛋白(β-catenin)和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)m RNA表达的变化,Western blot法检测β-catenin和Cyclin D1蛋白含量的表达变化。5、统计软件分析实验数据。结果:1、MTT结果:氯硝柳胺抑制SKOV3细胞生长,且其抑制作用与药物剂量及作用时间呈正相关。统计后分析,氯硝柳胺抑制50%SKOV3细胞生长的药物浓度随氯硝柳胺作用时间延长而降低:24h的IC50浓度约为6.29u M/L,48h的IC50浓度约为3.55u M/L,72h的IC50浓度约为1.31u M/L。本实验选取4u M/L及8u M/L作为后续实验浓度。2、MTT结果:8u M/L氯硝柳胺对SKOV3细胞的抑制作用显著高于4u M/L氯硝柳胺,差异有意义(P=0.000)。氯硝柳胺联合顺铂对于SKOV3细胞的抑制作用与单用氯硝柳胺组相比,差异无明显意义(P0.05)。3、FCM结果:氯硝柳胺联合顺铂用药组与单纯氯硝柳胺用药组分别作用于SKOV3细胞24h后肿瘤细胞的凋亡率无明显差异。4、RT-PCR及Western Blot检测结果表明:予氯硝柳胺作用24h后,Wnt/β-catenin通路中β-catenin及Cyclin D1 m RNA及蛋白质的表达水平较正常对照组降低,且氯硝柳胺药物浓度越高,β-catenin及Cyclin D1 m RNA及蛋白质的表达水平越低(P=0.000);氯硝柳胺联合一线化疗药物作用24h后检测β-catenin及Cyclin D1m RNA及翻译蛋白产物表达量,结果显示,与单用氯硝柳胺组相比差异无统计学意义(P0.05)。结论:1、抗肠寄生虫药氯硝柳胺对SKOV3细胞具有生长抑制作用,在一定范围内与药物剂量及作用时间呈正相关。2、氯硝柳胺阻断Wnt/β-catenin通路的转导,在一定范围内其阻断作用与药物剂量相关,即药物浓度越高,其抑制作用越显著。3、氯硝柳胺促进SKOV3细胞凋亡与其抑制β-catenin及Cyclin D1基因和蛋白的表达有关。4、氯硝柳胺与一线化疗药物顺铂配伍使用无协同杀伤SKOV3细胞的作用。5、化疗药物顺铂杀伤SKOV3的作用与Wnt/β-catenin通路无明显相关性。
【关键词】：卵巢癌 氯硝柳胺 β-连环蛋白 细胞周期蛋白D1
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语10-11
• 前言11-13
• 研究现状、成果11-12
• 研究目的、方法12-13
• 对象与方法13-25
• 1 研究对象13
• 2 实验材料13-15
• 3 实验方法15-24
• 4 统计学方法24-25
• 结果25-32
• 1 SKOV3细胞的镜下形态25
• 2 氯硝柳胺对SKOV3细胞的毒性作用25-26
• 3 氯硝柳胺联合化疗药物对SKOV3细胞的毒性作用26-27
• 4 FCM定量观察细胞凋亡27-29
• 5 氯硝柳胺及氯硝柳胺联合DDP作用SKOV3细胞 24h后β-catenin与Cyclin D1 m RNA表达情况29-31
• 6 氯硝柳胺及氯硝柳胺联合DDP作用SKOV3细胞24h后β-catenin与CyclinD1蛋白 表达情况31-32
• 讨论32-41
• 1 Wnt/β-catenin信号通路32-33
• 2 Wnt/β-catenin信号通路与卵巢癌33-34
• 3 氯硝柳胺抗肿瘤细胞生长34-39
• 4 氯硝柳胺临床应用的可能性及面临的挑战39
• 5 展望39-41
• 结论41-42
• 参考文献42-48
• 发表论文和参加科研情况48-49
• 综述 卵巢癌干细胞的研究现状及相应的靶向治疗49-62
• 综述参考文献56-62
• 致谢62

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本文编号：371364