昼夜节律基因CRY1介导细胞自噬调控卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/DDP耐药性的相关机制研究

发布时间：2023-05-04 03:05

　　目的:检测昼夜节律基因CRY1与细胞自噬在卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/DDP及其亲本细胞株A2780中的表达差异,探讨CRY1与细胞自噬的相关性及其是否参与A2780/DDP耐药性的产生。方法:1.qRT-PCR及Western Blot检测A2780及A2780/DDP细胞株中细胞自噬和昼夜节律基因及相关蛋白表达水平;细胞免疫荧光检测LC3和CRY1的表达及分布情况。2.顺铂处理肿瘤细胞后,CCK8检测细胞1⁵天的存活率;吖啶橙及Hoechst33342观察自噬囊泡和细胞核形态;Western Blot检测自噬和昼夜节律基因表达。3.3-甲基腺嘌呤处理肿瘤细胞后,Western Blot检测自噬和昼夜节律基因的表达变化。4.慢病毒介导CRY1干扰及过表达质粒分别调控A2780和A2780/DDP细胞CRY1基因的表达水平;qRT-PCR和Western Blot检测CRY1稳定转染细胞CRY1及细胞自噬相关蛋白;CCK8比较调控CRY1前后细胞顺铂敏感性变化。结果:1.与A2780细胞相比,qRT-PCR结果显示A2780/DDP中CRY1、CRY2、CLO...

【文章页数】：89 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
缩略语及中英文对照
前言
材料
    1 实验材料
    2 主要溶液及试剂配方
研究方法
    1 细胞培养
    2 Western Blot
    3 实时荧光定量PCR
    4 稳定转染目的基因细胞的构建
    5 细胞存活率测定(CCK8 法)
    6 Hoechst33342 染色荧光显微镜检测细胞凋亡
    7 吖啶橙染色检测自噬囊泡
    8 细胞免疫荧光
    9 统计学分析
实验结果
    1 卵巢癌细胞株A2780 及其顺铂耐药细胞株A2780/DDP的自噬活性和昼夜节律基因表达情况分析
        1.1 自噬相关基因及蛋白检测
        1.2 免疫荧光法检测LC3 表达情况
        1.3 昼夜节律基因及蛋白检测
        1.4 免疫荧光法检测CRY1蛋白表达情况
        1.5 小结
    2 A2780与A2780/DDP细胞株顺铂处理后的自噬活性与昼夜节律基因表达情况分析
        2.1 CCK8法检测细胞的存活情况
        2.2 吖啶橙染色检测细胞自噬活性
        2.3 Hoechst33342 染色法检测细胞凋亡
        2.4 Western Blot检测自噬相关蛋白和昼夜节律基因的表达情况
        2.5 小结
    3 抑制细胞自噬后A2780和A2780/DDP细胞昼夜节律基因CRY1表达情况
        3.1 使用细胞自噬抑制剂后检测昼夜节律基因CRY1的表达
        3.2 小结
    4 调控A2780/DDP和 A2780 细胞中CRY1表达后细胞自噬及活性检测
        4.1 细胞筛选浓度的确定
        4.2 病毒转染MOI值的确定
        4.3 CRY1基因干扰序列的筛选以及干扰和过表达后昼夜节律基因检测
        4.4 CRY1基因敲减及过表达后细胞自噬蛋白检测
        4.5 CRY1基因敲减及过表达后细胞活性检测
        4.6 小结
讨论
    1 A2780/DDP细胞中CRY1蛋白表达水平低于A2780,自噬活性强于A2780
    2 顺铂影响昼夜节律基因CRY1的表达及自噬效应
    3 自噬下调CRY1表达
    4 CRY1调控A2780/DDP的顺铂敏感性
结论
参考文献
文献综述
    参考文献
致谢
作者简历



本文编号：3807825