FSTL1在调节卵巢癌细胞上皮间质转化和干细胞干性中的作用

发布时间：2023-06-09 18:34

　　卵巢癌由于早期症状不明显、治疗预后不佳,成为最常见、最致命的妇科肿瘤,是妇女死亡的主要原因。目前临床上治疗卵巢癌的主要方式是手术治疗联合术后化疗。术后复发性以及化疗耐药性,使得患者生存质量难以得到保障,那么寻求新的卵巢癌治疗方法久变得尤为迫切。卵泡抑素样蛋白1(FSTL1)是一种富含半胱氨酸的分泌性酸性蛋白,具有多种生物学功能。近年来关于FSTL1在各种疾病、肿瘤等方面都有初步研究,但其在肿瘤发生及发展中的机制仍不清楚。因此对FSTL1及其作用机制进行研究有可能为治疗肿瘤提供新的思路。我们前期研究表明是Notch3信号通路介导PTH调控卵巢癌细胞上皮间质转化和干细胞干性,后来在实验中发现PTH可以促进卵巢癌细胞中FSTL1的表达。本课题拟在此前的研究基础上探究FSTL1对卵巢癌转移和复发的影响,揭示FSTL1在调节卵巢癌细胞上皮间质转化和干细胞干性中的作用。首先我们在蛋白质水平上检测了PTH对卵巢癌细胞中FSTL1表达的影响。通过用PTH作用于卵巢癌细胞,利用Western blot检测发现PTH可以促进卵巢癌细胞中FSTL1的表达。接下来,我们通过Western blot、细胞克隆形...

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【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
缩略语
第一章 绪论
    1 引言
        1.1 卵巢癌
        1.2 FSTL1
            1.2.1 FSTL1的生物学特征
            1.2.2 FSTL1在相关肿瘤中的研究
            1.2.3 FSTL1参与的肿瘤信号通路
        1.3 Notch3信号通路及其在肿瘤细胞中的研究
        1.4 上皮间质转化(EMT)及其相关研究
        1.5 瘤干细胞(CSCs)及其相关研究
    2 前期研究结果
    3 研究目的和意义
    4 实验内容及设计方案
        4.1 实验内容
        4.2 实验方案
第二章 甲状旁腺激素上调卵巢癌细胞中FSTL1的表达
    1 实验材料与方法
        1.1 材料与试剂
            1.1.1 实验材料
            1.1.2 实验试剂
        1.2 实验仪器
        1.3 主要溶液配制
    2 实验方法
        2.1 细胞复苏与传代
            2.1.1 细胞复苏
            2.1.2 细胞传代
        2.2 细胞分盘
        2.3 药物给予实验
        2.4 细胞裂解液的制备
        2.5 蛋白浓度测定及样品制备
        2.6 Westernblot
    3 结果与分析
        3.1 PTH上调卵巢癌细胞中FSTL1的表达
    4 讨论
第三章 FSTL1调控卵巢癌细胞EMT过程
    1 实验材料
        1.1 材料与试剂
            1.1.1 实验材料
            1.1.2 实验试剂
        1.2 主要溶液配制
        1.3 主要仪器
    2 实验方法
        2.1 .质粒转化
        2.2 提取质粒
        2.3 慢病毒包装
            2.3.1 质粒扩增
            2.3.2 培养、分盘293T细胞
            2.3.3 脂质体转染
            2.3.4 病毒收集
            2.3.5 感染目的细胞
        2.4 细胞伤口愈合实验(Cellwoundhealing)
        2.5 细胞侵袭实验(Cellinvasionassays)
        2.6 克隆形成实验(ColonyFormationAssays)
        2.7 细胞活力实验(Cellviability)
        2.8 细胞瞬时转染
    3 统计学分析
    4 结果与分析
        4.1 过表达FSTL1增强卵巢癌细胞转录因子的表达
        4.2 过表达FSTL1增强卵巢癌细胞EMT过程
        4.3 过表达FSTL1促进卵巢癌细胞伤口愈合
        4.4 过表达FSTL1促进卵巢癌细胞侵袭
        4.5 过表达FSTL1促进卵巢癌细胞平板克隆的形成
        4.6 过表达FSTL1增强卵巢癌细胞增殖能力
        4.7 加入重组蛋白rhFSTL1增强卵巢癌细胞EMT
        4.8 加入重组蛋白rhFSTL1促进卵巢癌细胞增殖
        4.9 敲低FSTL1的表达会抑制卵巢癌细胞EMT过程
        4.10 敲低FSTL1的表达会抑制卵巢癌细胞增殖
    5 讨论
第四章 FSTL1调控卵巢癌细胞干细胞干性
    1 实验材料
        1.1 材料与试剂
            1.1.1 实验材料
            1.1.2 实验试剂
        1.2 实验仪器
    2 实验方法
        2.1 细胞培养与传代
        2.2 细胞瞬时转染
        2.3 细胞裂解液制备
        2.4 蛋白浓度测定
        2.5 Westernblot
        2.6 微球形成实验
    3 结果与分析
        3.1 过表达FSTL1增强卵巢癌细胞干细胞干性
        3.2 重组蛋白rhFSTL1增强卵巢癌细胞干细胞干性
        3.3 敲低FSTL1的表达抑制卵巢癌细胞干细胞干性
        3.4 微球形成实验
    4 讨论
第五章 Notch3信号通路介导FSTL1调控卵巢癌细胞EMT和干细胞干性
    1 实验材料
        1.1 材料与试剂
            1.1.1 实验材料
            1.1.2 实验试剂
        1.2 实验仪器
    2 实验方法
        2.1 细胞培养与传代
        2.2 蛋白质提取
        2.3 蛋白质浓度测定与定量
        2.4 Westernblot
        2.5 克隆形成实验
        2.6 细胞活力实验
    3 结果与分析
        3.1 Notch3信号介导FSTL1的表达
        3.2 敲低Notch3会抑制卵巢癌细胞中FSTL1的表达
        3.3 敲低Notch3表达抑制卵巢癌EMT和干细胞干性
        3.4 敲低Notch3表达抑制卵巢癌细胞的克隆形成
        3.5 敲低Notch3表达抑制卵巢癌细胞的增殖能力
        3.6 重组蛋白rhFSTL1对低表达Notch3卵巢癌细胞的影响
    4 讨论
第六章 结论
参考文献
硕士期间获奖情况
硕士期间发表论文
致谢



本文编号：3832706