过表达孕激素受体B提高子宫内膜癌细胞对醋酸甲羟孕酮敏感性的研究

发布时间：2023-09-02 11:42

　　目的:研究过表达孕激素受体B,可增强子宫内膜癌细胞Ishikawa和KLE对孕激素类药物醋酸甲羟孕酮的敏感性,为临床子宫内膜癌孕激素保守治疗提供理论依据。方法:先提取子宫内膜癌细胞Ishikawa的RNA,逆转录为c DNA作为模板,设计PRB的CDS区全长的特异性引物并对目的片段进行扩增,然后将目的片段产物克隆到pcDNA3.1(+)质粒载体中,再将连接产物转化到DH5α感受态细胞,在预先制备好的LB选择性固体培养基(含氨苄)中进行培养,挑阳性克隆经300 rpm,培养12-16 h后,经双酶切及测序鉴定,构建pcDNA3.1(+)-PRB重组质粒载体。体外培养子宫内膜癌细胞Ishikawa和KLE,将构建好的pcDNA3.1(+)-PRB重组质粒载体转染至Ishikawa和KLE细胞中,运用Real-time PCR、Western blot技术检测转染后Ishikawa和KLE中PRB m RNA和蛋白的表达变化,来确定是否构成PRB过表达的细胞系。然后用醋酸甲羟孕酮来处理转染前后子宫内膜癌细胞Ishikawa和KLE,用CCK-8法、划痕实验和单克隆形成实验来检测细胞增殖活性和...

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
第2章 实验材料
    2.1 主要仪器
    2.2 主要试剂
    2.3 相关试剂盒
    2.4 相关生物信息学分析网站与软件
第3章 实验方法
    3.1 主要溶液的配制
    3.2 引物设计
    3.3 细胞培养
    3.4 pcDNA3.1(+)-PRB重组载体构建
    3.5 细胞转染
    3.6 Real-time PCR检测转染后PRB mRNA的表达
    3.7 Western Blot检测转染后PRB蛋白的表达
    3.8 CCK-8 法检测MPA对转染前后Ishikawa和 KLE细胞系增殖的影响
    3.9 单克隆形成实验检测MPA对转染前后Ishikawa和 KLE细胞系增殖的影响
    3.10 划痕实验检测MPA对转染前后Ishikawa和 KLE细胞系迁移的影响
    3.11 统计分析
第4章 实验结果
    4.1 细胞RNA的提取
    4.2 pcDNA3.1(+)-PRB重组载体构建
    4.3 Real-time PCR检测转染后PRB mRNA的表达情况
    4.4 Western Blot检测转染后PRB蛋白的表达情况
    4.5 CCK-8法检测细胞增殖能力
    4.6 单克隆形成实验检测细胞增殖能力
    4.7 划痕实验检测细胞迁移能力
第5章 实验讨论
第6章 实验结论
参考文献
综述
    参考文献
研究生期间科研成果
致谢



本文编号：3845137