铂耐药和铂敏感上皮性卵巢癌中HMGB1、BRCA1和P62蛋白的表达及其临床意义

发布时间：2017-05-23 19:17

  本文关键词：铂耐药和铂敏感上皮性卵巢癌中HMGB1、BRCA1和P62蛋白的表达及其临床意义，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：在体外细胞水平从细胞自噬角度探讨卵巢癌耐药的发生机制,检测自噬调节基因HMGB1和P62在卵巢癌中的表达。免疫组化检测耐药相关基因BRCA1和自噬调节基因HMGB1和P62在上皮性卵巢癌中的表达情况,分析其表达与组织学分级、FIGO分期、化疗耐药的关系以及两两之间表达的相关性,了解BRCA1、HMGB1和P62在卵巢癌中的表达、生物学行为及其预后的关系；进一步阐明卵巢癌中细胞自噬相关基因]HMGB1和P62与耐药基因BRCA1的关系,探讨卵巢癌耐药的机理,为指导临床选择合适的治疗方案、判断预后以及寻找有效的逆转肿瘤耐药方法提供理论依据。方法：(1)采用CCK-8法检测不同浓度顺铂(cisplatin, DDP)对SKOV3及SKOV3/DDP细胞的抑制作用,以及用半定量PCR (Semi-quantitative PCR, RT-PCR)、Western Blotting等技术,检测HMGB1和P62的表达。(2)采用免疫组织化学方法检测BRCA1、HMGB1和P62在良性上皮性卵巢肿瘤组织、交界性肿瘤及上皮性卵巢癌组织中的表达。其中良性上皮性卵巢肿瘤组织13例；卵巢交界性肿瘤组织8例；上皮性卵巢癌组织共39例,其中浆液性腺癌23例、粘液性腺癌4例、子宫内膜样腺癌5例、透明细胞癌5例、混合性癌2例。组织学分级：高分化8例、中低分化31例。(2012年)FIGO分期为：Ⅰ-Ⅱ期19例,Ⅲ-Ⅳ期20例；铂敏感26例,铂耐药13例；(3)用SPSS19.0软件对所得数据进行处理,采用χ2检验和Spearman等级相关分析对数据进行统计学分析。P0.05具有统计学意义。结果：1.不同浓度DDP处理SKOV3及SKOV3/DDP细胞后,均有抑制细胞生长及促凋亡作用,且呈时间和剂量依赖性。研究发现HMGB1 mRNA和蛋白在SKOV3/DDP细胞中的表达低于SKOV3细胞。P62 mRNA和蛋白在SKOV3/DDP细胞中的表达也低于SKOV3细胞。2.免疫组化结果显示BRCA1蛋白位于细胞核中,呈棕褐色颗粒；而P62蛋白表达定位于胞浆中,呈棕褐色颗粒：HMGB1蛋白位于细胞胞核及部分胞浆,呈棕褐色颗粒。3. BRCA1蛋白的表达：在13例卵巢良性肿瘤组织中BRCA1蛋白表达阳性的有7例(53.8%)；8例卵巢交界性肿瘤中BRCA1蛋白表达阳性的4例(50%)；39例上皮性卵巢癌组织中表达阳性的有8例(23.1%)。上皮性卵巢癌组织中BRCA1蛋白的表达水平明显低于良性肿瘤及卵巢交界性肿瘤组织,有显著性差异(χ2=6.440,P=0.0400.05)。BRCA1表达与临床病理学特征无显著相关性(P0.05)。在上皮性卵巢癌中BRCA1蛋白在铂敏感卵巢癌的阳性表达低于耐药卵巢癌,具有极显著的差异(χ2=7.863,P=0.0050.01)。4. HMGB1蛋白的表达：HMGB1在卵巢恶性肿瘤组织、卵巢癌交界性肿瘤、卵巢良性肿瘤组织中的阳性表达率分别为97.4%(38/39)、100%(8/8)、92.3%(12/13)。在不同卵巢组织中,HMGB1表达阳性率无显著差异(P0.05)。HMGB1表达与肿瘤组织类型有关(P0.05),与其它临床病理学特征无显著相关性。HMGB1蛋白在铂敏感和耐药性上皮性卵巢癌中无统计学意义。5.P62蛋白的表达：P62在卵巢恶性肿瘤组织、卵巢癌交界性肿瘤、卵巢良性肿瘤组织中的阳性表达率分别为53.8%(21/39)、50%(4/8)、0%(0/13)。上皮性卵巢癌组织中P62蛋白的表达水平明显高于良性肿瘤及卵巢交界性肿瘤组织,有显著性差异(χ2=11.117,P=0.004)。P62表达与肿瘤分期有关,而与其它临床病理学特征没有显著相关性。上皮性卵巢癌中P62蛋白在铂敏感中的阳性表达率高于耐药卵巢癌,有显著差异性(χ2=6.174,P=0.013)。6.在卵巢癌组织中,BRCA1和P62蛋白表达呈负相关(r=-0.399,P=0.012)。结论：1. HMGB1 mRNA和蛋白在SKOV3/DDP中的表达率下调,HMGB1在两种细胞中呈无或弱相关性,HMGB1可能与卵巢癌耐药无关。P62 mRNA和蛋白在SKOV3/DDP中的表达率也下调。提示P62表达水平的变化在铂耐药卵巢癌中扮演着一定的角色,并可能与上皮性卵巢癌铂耐药的发生、发展相关。2.上皮性卵巢癌中BRCA1蛋白在铂敏感卵巢癌的阳性表达低于耐药卵巢癌,说明BRCA1蛋白可能介导卵巢癌耐药的发生、发展过程。3. HMGB1蛋白表达在不同卵巢组织和铂敏感卵巢癌及耐药卵巢癌中无明显差异,可能与卵巢癌耐药过程无关。HMGB1表达与肿瘤组织类型有关,说明HMGB1可能参与了卵巢癌的发生有关。4.P62蛋白的表达与卵巢癌临床分期有关,提示P62可能与卵巢癌的发展有关；上皮性卵巢癌中P62蛋白在铂敏感卵巢癌的阳性表达高于耐药卵巢癌,说明P62蛋白可能参与卵巢癌耐药的发生发展过程。5. BRCAl和P62在卵巢癌中的表达呈负相关,P62阳性表达越高,BRCA1阳性表达则越低。两者可能共同参与了卵巢癌的疾病恶性进展过程及不良预后,对卵巢癌的预后及术后的治疗可能有一定的指导作用。并且BRCA1和P62可作为预测上皮性卵巢癌铂耐药的标志性蛋白。
【关键词】：卵巢癌 BRCA1 HMGB1 P62 自噬 免疫组织化学
【学位授予单位】：昆明理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 摘要6-9
• Abstract9-16
• 英文缩略词16-18
• 第一章 绪论18-30
• 1.1 卵巢癌及其耐药的研究进展18-21
• 1.1.1 卵巢癌的危害18
• 1.1.2 卵巢癌的常用治疗方法及作用机制18-19
• 1.1.3 卵巢癌化疗耐药19-21
• 1.2 卵巢癌与自噬21-22
• 1.3 自噬概述22-24
• 1.3.1 自噬的概念及功能22-23
• 1.3.2 自噬与肿瘤23-24
• 1.4 HMGB1概述24-26
• 1.4.1 HMGB1的基本结构及功能24-25
• 1.4.2 HMGB1与肿瘤的关系25-26
• 1.5 P62概述26-27
• 1.5.1 P62的基本结构及功能26-27
• 1.5.2 P62与肿瘤的关系27
• 1.6 BRCA1概述27-28
• 1.6.1 BRCA1的基本结构及功能27-28
• 1.6.2 BRCA1与肿瘤的关系28
• 1.7 选题意义及目的28-30
• 第二章 自噬与人卵巢癌顺铂耐药的关系和作用机制研究30-44
• 2.1 前言30
• 2.2 材料30-33
• 2.2.1 细胞株30
• 2.2.2 主要试剂及配制30-32
• 2.2.3 主要实验仪器32-33
• 2.3 方法33-39
• 2.3.1 SKOV3/DDP耐药细胞系的建立33
• 2.3.2 SKOV3和SKOV3/DDP细胞株培养33
• 2.3.3 CCK-8法检测耐药指数33-34
• 2.3.4 QRT-PCR检测HMGB1、p62 mRNA的表达34-36
• 2.3.5 Western Blotting检测HMGB1、p62蛋白在SKOV3和SKOV3/DDP细胞中的表达水平36-38
• 2.3.6 统计学处理38-39
• 2.4 结果39-41
• 2.4.1 细胞抑制情况及SKOV3/DDP细胞顺铂耐药水平39
• 2.4.2 RT-PCR结果39-40
• 2.4.3 Western Blotting结果40-41
• 2.5 讨论41-44
• 第三章 BRCA1、HMGB1、P62在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义44-60
• 3.1 前言44-45
• 3.2 材料与方法45-46
• 3.2.1 临床资料45
• 3.2.2 主要实验试剂45
• 3.2.3 主要实验仪器45-46
• 3.3 免疫组化46-48
• 3.3.1 石蜡切片逐级脱腊和水化的时间46
• 3.3.2 免疫组化步骤及注意事项46-47
• 3.3.3 免疫组织化学的用途47-48
• 3.4 结果判定48
• 3.5 统计学处理48
• 3.6 结果分析48-56
• 3.6.1 BRCA1蛋白的表达结果48-51
• 3.6.2 HMGB1蛋白的表达结果51-53
• 3.6.3 P62蛋白的表达结果53-56
• 3.6.4 BRCA1、P62蛋白在卵巢癌中表达的相关性56
• 3.7 讨论56-60
• 3.7.1 BRCA1在BET、交界性肿瘤、EOC中的表达56-57
• 3.7.2 HMGB1在BET、交界性肿瘤、EOC中的表达57-58
• 3.7.3 P62在BET、交界性肿瘤、EOC中的表达58-60
• 第四章 结论与展望60-62
• 参考文献62-71
• 致谢71-72
• 附录72-74

【参考文献】

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 赵婷秀;莪术瓜蒌汤含药血清诱导人肺癌细胞凋亡的实验研究[D];湖北中医学院;2004年

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本文编号：388869