过表达THBS2对宫颈鳞癌SiHa细胞中MMPs家族表达差异的影响及过表达MMP1/MMP2对SiHa细胞侵袭迁移的影响

发布时间：2024-02-23 16:13

　　宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤之一。在宫颈癌的常见病理类型中,鳞状细胞癌占85%,腺癌占15%。其发病原因主要是HPV高危险型的持续感染导致,HPV16型主要与鳞癌相关,HPV18型主要与腺癌相关,但宫颈癌的发生与发展的过程并不是HPV持续性感染作为唯一原因的,这一过程是一个多基因参与的复杂过程,有多个调控通路共同作用,具体的分子机制还尚不明确。血小板反应蛋白2(Thrombospondin 2,THBS2)是一种介导细胞-细胞或细胞-间质作用的糖蛋白,在多种肿瘤中抑制血管的形成,基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinases,MMPs)家族是一类可通过降解细胞外基质从而影响肿瘤侵袭与转移的蛋白酶家族。在我们的前期研究中,已经通过生物信息学证明,THBS2是miR-1246的一个靶基因,在体外实验中转染miR-1246的宫颈鳞癌SiHa细胞THBS2表达水平明显下降,且体现出促进细胞侵袭与迁移的特性;在下调miR-1246的宫颈鳞癌SiHa细胞THBS2表达水平明显上升,在体外实验中裸鼠移植瘤MMP2和MMP9的蛋白水平表达下降;且过表达THBS2后可促进SiHa细胞的...

【文章页数】：116 页

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摘要
ABSTRACT
前言
第一部分 过表达THBS2 后宫颈癌SiHa细胞中MMPs家族表达差异
    1.1 材料与方法
        1.1.1 实验细胞株来源
        1.1.2 实验试剂
        1.1.3 实验器材
    1.2 实验方法和步骤
        1.2.1 细胞的体外培养
        1.2.2 实验稳转细胞株构建
        1.2.3 实验分组
        1.2.4 实时荧光定量PCR方法检测THBS2mRNA的表达水平，并检测在宫颈鳞癌SiHa细胞中过表达THBS2后MMP1、MMP2、MMP7、MMP9表达的差异
        1.2.5 Western Blot检测转染慢病毒后宫颈鳞癌SiHa细胞中THBS2、MMP1、MMP2、MMP7、MMP9蛋白表达的差异
    1.3 统计学分析
    1.4 结果及分析
        1.4.1 过表达THBS2慢病毒转染宫颈鳞癌SiHa细胞荧光及白光照片
        1.4.2 实时荧光定量PCR检测转染过表达THBS2慢病毒的宫颈鳞癌SiHa细胞中THBS2/MMP1/MMP2/MMP7/MMP9的mRNA表达水平
        1.4.3 Western Blot实验检测转染过表达THBS2慢病毒的宫颈鳞癌SiHa细胞中THBS2/MMP1/MMP2/MMP7/MMP9的蛋白表达水平
    1.5 讨论
    参考文献
第二部分 过表达MMP1/MMP2 对宫颈鳞癌SiHa细胞侵袭迁移的影响
    2.1 材料与方法（部分实验同上述）
        2.1.1 材料
        2.1.2 实验分组
        2.1.3.CCK8 法检测细胞增值能力
        2.1.4 流式细胞术检测细胞凋亡实验
        2.1.5 Transwell 法检测细胞侵袭能力的实验
        2.1.6 细胞划痕试验
    2.2 统计学分析
    2.3 实验结果
        2.3.1 实时荧光定量PCR检测宫颈鳞癌SiHa细胞中MMP1和MMP2 mRNA的表达水平
        2.3.2 用Western Blot实验检测转染过表达慢病毒MMP1和MMP2后宫颈鳞癌SiHa细胞中MMP1和MMP2蛋白质水平相对表达量
        2.3.3 CCK8法间接检测转染过表达转染过表达慢病毒MMP1和MMP2后宫颈鳞癌SiHa细胞增殖的变化
        2.3.4 流式细胞术检测转染过表达转染过表达慢病毒MMP1和MMP2后宫颈鳞癌SiHa细胞凋亡情况的变化
        2.3.5 Transwell实验检测转染过表达慢病毒MMP1和MMP2后宫颈鳞癌SiHa细胞穿过matrigel胶膜细胞个数来间接反映细胞侵袭能力的差异
        2.3.6 划痕实验检测转染过表达慢病毒MMP1和MMP2后宫颈鳞癌SiHa细胞划痕愈合能力间接反映细胞迁移能力的差异
    2.4 讨论
    参考文献
全文总结
不足之处
创新点
综述 宫颈癌侵袭转移相关主要机制的研究进展
    参考文献
发表论文



本文编号：3907638