宫颈鳞癌中HPV E6与p53和PinX1表达水平及端粒酶活性关系的研究

发布时间：2017-05-26 07:16

  本文关键词：宫颈鳞癌中HPV E6与p53和PinX1表达水平及端粒酶活性关系的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景及目的：宫颈癌是威胁女性生殖健康的恶性肿瘤,其发病率在女性恶性肿瘤中居第三位,近年来年轻患者的宫颈癌发病率呈上升趋势。由于其确切的发病机制目前仍然不清,因此给临床防治带来极大的困难。持续的高危型人乳头瘤病毒(high-risk human papillomaviruses, HR-HPV)的感染,是导致宫颈癌发生的重要诱因。99%宫颈癌的患者合并了HPV感染。HPV可能通过某些机制启动癌基因的激活进而使正常细胞发生转化。研究发现,在宫颈癌中HPV主要通过原癌蛋白E6来促进端粒酶活性。HPV E6能破坏细胞正常的调节,包括急性损伤调节以及起始基因的稳定,维持肿瘤的恶性表达。近来研究发现,端粒是保护染色体末端的重要组成部分,端粒酶活性异常升高与肿瘤的发生发展密切相关,端粒酶过度激活会错误修复严重缩短的端粒,使得细胞无法进入正常死亡,反而向癌细胞转化。野生型p53是重要的信号调节因子、抑癌基因。约一半的人类恶性肿瘤中p53基因发生了突变,突变型p53使损伤的DNA细胞进行恶性复制,p53突变成了癌基因。然而,在宫颈癌的相关研究中,p53主要以失活为主,很少发生突变,因此p53的失活对宫颈癌发生发展起着重要作用。另外,端粒酶的强效抑制因子PinX1是一种重要的抑癌基因,在正常的组织中几乎都表达,在大部分的肿瘤中都可以发现PinX1的缺失。PinX1不仅强有力地抑制了端粒酶的活性,而且在端粒酶长度的维持上也起着重要的作用。新近研究发现,宫颈癌细胞系中PinX1是p53的新的靶基因,存在“p53-PinX1"通路,该通路可以被HPVE6沉默,然而宫颈癌在体组织中并未得到相关验证。本研究选取宫颈鳞癌、宫颈鳞癌癌旁组织、正常宫颈组织三组对照研究。探讨在体组织中HPV E6,p53, PinX1的表达变化,以及端粒酶活性、端粒长度变化情况。通过相关性分析,了解它们在体水平的内在联系,为"p53-PinX1"通路提供佐证,从而为宫颈癌的发病机制及临床诊治提供新思路和新靶点。主要研究内容：第一部分宫颈鳞癌组织中HPV E6,p53及PinX1的表达1.检测在体水平HPV E6,p53,PinX1分子的mRNA在宫颈鳞癌、癌旁组织、正常宫颈组织的表达水平；2.检测宫颈癌组织、癌旁组织、正常宫颈组织中HPV E6.p53及PinX1蛋白的表达水平；3.通过免疫组化再次检测HPV E6,p53,PinX1在三种组织中的表达及分布情况。第二部分宫颈鳞癌组织中端粒酶活性及端粒长度的变化1.检测宫颈癌组织中端粒酶活性及端粒长度；2.检测HPV E6,p53,PinX1,端粒酶活性及端粒长度的相关性。主要研究方法：1.由深圳华大基因提供HPV基因测序检测,筛选HPV感染宫颈鳞癌及无HPV感染的正常宫颈,收集2013年3月-2014年2月第三军医大学大坪医院妇产科确诊临床分期I B1-Ⅱ A2未行放化疗宫颈鳞癌患者17例；正常宫颈组织10例。2.qPCR和Western blot检测相关分子在mRNA和蛋白的表达水平；3.免疫组化检测HPV E6,p53,PinX1在宫颈鳞癌、癌旁组织、正常宫颈组织中的表达及分布情况；4.端粒酶活性(TRAP法)测定宫颈鳞癌、癌旁组织、正常宫颈组织中端粒酶活性的变化,并进行定量分析；5.利用基因组DNA作为模版,采用PCR方法检测设计特异的端粒区域引物检测不同组织中端粒的长度；6.Spearman相关性分析HPV E6,p53,PinX1,端粒酶活性,端粒长度在宫颈鳞癌中的关系。主要研究结果：1.在mRNA水平：宫颈鳞癌中HPV E6表达显著高于癌旁组织(P0.05),因正常宫颈组织HPV E6几乎不表达,故HPV E6无正常对照组；在宫颈鳞癌组织中p53及PinX1的表达显著低于癌旁组织及正常宫颈组织(P0.05),癌旁组织中p53及PinX1的表达水平显著低于正常组织(P0.05)；2.利用Western blot通过半定量分析,在宫颈癌中HPV E6的蛋白表达显著高于癌旁组织(P0.01),同时p53、PinX1的蛋白表达显著低于癌旁及正常组织(P0.01),在癌旁组织中p53及PinX1的表达水平显著低于正常组织(P0.01)；3.免疫组化再次证实,HPV E6在宫颈癌中较癌旁组织HPV E6表达显著增高,正常宫颈组织几乎无HPV E6表达,p53、PinX1在宫颈癌组织中表达显著低于癌旁及正常宫颈组织；4.与癌旁组织及正常宫颈组织相比宫颈鳞癌中端粒酶活性显著增强(P0.01),端粒长度增加(P0.01)；5. Spearman相关性分析结果显示：在宫颈癌中HPV E6表达与p53、PinX1呈负相关关系(P0.05),与端粒酶活性表达呈正相关关系(P0.01),p53表达与PinX1表达呈正相关关系(P0.01)。结论：在宫颈癌组织中发现HPV E6表达上调,p53及PinX1表达下调,同时端粒酶活性增强,端粒长度增加,这不仅为“p53-PinXl"通路提供了在体水平的佐证,存在“HPVE6→p53下调→PinX1下调→端粒酶活性升高、端粒长度增加”的宫颈癌发病机制,更提示该机制可能在宫颈癌的发病机制中发挥重要作用。
【关键词】：宫颈鳞癌 HPV E6 p53 PinX1 端粒
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 缩略表语4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 宫颈鳞癌组织中HPV E6,p53及PinX1的表达13-27
• 2.1 材料与方法13-21
• 2.2 结果21-24
• 2.3 讨论24-26
• 2.4 小结26-27
• 第三章 宫颈鳞癌组织中端粒酶活性及端粒长度的变化27-41
• 3.1 材料与方法27-36
• 3.2 结果36-39
• 3.3 讨论39-40
• 3.4 小结40-41
• 全文总结41-42
• 参考文献42-45
• 文献综述 宫颈癌的诊治进展45-52
• 参考文献49-52
• 攻读硕士学位期间发表论文情况52-53
• 致谢53

【共引文献】

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本文编号：396096