神经管畸形动物模型中凋亡调控因子（miR-322、PCSK9）的表达规律及作用机制的研究

发布时间：2024-11-05 07:57

　　目的:神经管畸形(neural tube defects,NTDs)是一种常见的出生缺陷,通常是由胚胎发育早期神经管闭合不完全或者闭合失败引起的。NTDs的发病率在1‰-5‰,其危险因素涉及环境、生物、遗传、辐射和化学药品等。NTDs作为一种复杂的多基因疾病,目前尚不清楚其具体病因,其遗传因素中的基因突变或各信号通路中分子间的相互作用和表达调控机制异常,可能在NTDs的发生中起着重要作用。细胞凋亡又称细胞程序性死亡,在胚胎发育、组织器官形态形成和功能确定等生命活动中普遍存在并发挥着重要作用。研究表明,在神经管发育过程中,由于自身基因缺陷或其他因素引起的细胞凋亡相关基因的功能紊乱,打破了细胞增殖与凋亡的动态平衡,则会导致NTDs的发生。在前期研究中,我们分别发现microRNA-322(miR-322)和前蛋白转化酶枯草溶菌素9型(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)在NTDs中低表达:在糖尿病引起的NTDs中,mi R-322低表达,且抑制高糖诱导的小鼠神经干细胞凋亡;在对E11孕鼠血清的蛋白质组的分析中发现,与对照组相...

【文章页数】：81 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

在孕小鼠E8.5灌胃给予ATRA(70mg/kg),制造胎鼠NTDs模型,并于E9.5观察胚胎发育形态。如图1.1A所示,对照组小鼠胚胎发育正常,尾部圆润饱满,神经管闭合;NTDs组小鼠胚胎表现出发育迟缓,胚胎体积较小,且神经管闭合失败。随后,使用HE染色观察胎鼠骶尾部神经管形态....

随后,对两组E9.5小鼠胚胎中miR-322和NOX4的表达水平进行检测。如图1.2A所示,使用qRT-PCR检测miR-322的表达情况,在NTDs小鼠胚胎中miR-322表达水平明显下调;使用WesternBlot检测NOX4蛋白的表达情况,发现NOX4在NTDs组表达明显....

此外,采用免疫荧光和TUNEL双染检测NOX4与细胞凋亡之间的关联。如图1.3A、1.3B所示,在E9.5小鼠胚胎中,NOX4蛋白广泛表达,且在NTDs组表达水平明显高于对照组。通过免疫荧光与TUNEL双染发现,TUNEL阳性信号更多的与高表达NOX4的细胞共定位。图1.3C展示....

生物信息网站(microRNA.org,TargetScan,starBase.)预测提示NOX4可能作为miR-322的候选靶基因。如图1.4所示,在NOX4mRNA的3’UTR存在一个miR-322的潜在结合位点(2437-2460)。RNApulldown实验验证NO....

本文编号：4011475