Bevacizumab靶向治疗卵巢癌及其对SKOV3细胞VEGF自分泌通路的抑制
本文关键词：Bevacizumab靶向治疗卵巢癌及其对SKOV3细胞VEGF自分泌通路的抑制，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：1.目的1)VEGF及其受体VEGFR1(Flt-1)、VEGFR2(KDR)在上皮性卵巢癌组织中的表达与临床预后的关系;2)SKOV3细胞VEGF自分泌现象及Bevacizumab对其增殖的抑制作用研究。2.方法1)VEGF及其受体VEGFR1、VEGFR2在上皮性卵巢癌组织中的表达及与临床预后研究:(1)正常卵巢、良性上皮性卵巢肿瘤及上皮性卵巢癌组织中VEGF、VEGFR1及VEGFR2的表达差异;(2)上皮性卵巢癌组织中VEGF及VEGFR1、VEGFR2的表达与临床病理参数之间的关系;(3)VEGF及VEGFR1、VEGFR2三者阳性表达之间的相关性;(4)VEGF及VEGFR1、VEGFR2三者共高表达与非共高表达5年生存率比较。2)上皮性卵巢癌细胞中VEGF自分泌机制研究:(1)对比及筛选上皮性卵巢癌细胞系中VEGF、VEGFR1(Flt-1)、VEGFR2(KDR)的表达差异;(2)检测不同培养时间培养基血清中VEGF含量;(3)外源加入不同浓度rh VEGF检测筛选后细胞系增殖情况;(4)验证细胞自分泌途径主要结合VEGFR2(KDR)分泌机制。3)Bevacizumab(Bev)对上皮性卵巢癌细胞增殖影响及机制研究:(1)镜下观察各种Bev浓度梯度下作用SKOV3细胞24h后细胞轮廓改变情况;(2)MTT法检测不同浓度Bev及对照组细胞的增殖情况;(3)Annexin-FITC/PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡;(4)WB分析不同浓度Bev作用SKOV3后Flt-1、KDR及p-KDR表达变化;(5)通过Ki8751选择性抑制KDR受体,初步推断其下游ERK可能参与Bev直接抑制SKOV3细胞自分泌通路。3.结果1)VEGF及其受体VEGFR1、VEGFR2在上皮性卵巢癌组织中的染色强度明显高于良性卵巢肿瘤及正常卵巢上皮;并且VEGF及其受体在上皮性卵巢癌组织中的表达与临床分期及腹水量差异具有统计学意义;在相关分析中高表达的VEGF与VEGFR2(r=0.316,p0.05)、VEGFR1与VEGFR2(r=0.415,p0.05)均存在相关性;VEGF及其受体的三者共高表达较非共高表达患者的5年生存率差异具有统计学意义(p=0.044)。2)人卵巢癌细胞株SKOV3中存在VEGF及其受体Flt-1、KDR的共表达及相对高表达(p0.05),不同浓度的rh VEGF对卵巢癌细胞株SKOV3有促进增殖作用,且随着浓度梯度的递增,增殖成正比,初步推断该过程可能由KDR介导(t=7.64;t=5.53;t=4.22;t=6.59,p0.05;),而非Flt-1介导(t=2.05;t=2.34;t=1.32,p0.05),同时外源性rh VEGF可刺激SKOV3细胞VEGFR2(KDR)(t=5.81,*P0.05)及p-VEGFR2(p-KDR)(t=12.43,*P0.05)的表达增高,提示卵巢癌细胞株VEGF的自分泌机制主要通过KDR介导,而非Flt-1,并通过磷酸化受体p-KDR激活下游信号转导途径发挥作用。3)不同浓度Bevacizumab对卵巢癌细胞株SKOV3有抑制增殖、增加凋亡作用(*P0.05);WB结果提示Bev以上的作用可能与阻断VEGF自分泌环路有关,即降低相应受体VEGFR2(KDR)/p-VEGFR2(p-KDR)的表达(*P0.05),而非VEGFR1(Flt-1)(P0.05)。此外,erk及p-erk分子在Bev、Ki8751(VEGFR2抑制剂)及Bev+Ki8751组中的表达明显较空白对照组显著减少(*P0.05),提示Bevacizumab可能通过间接抑制VEGFR2下游信号通路中erk及p-erk的表达而抑制细胞VEGF自分泌功能,进一步抑制卵巢癌细胞的增殖。4.结论1)VEGF及VEGFR1、VEGFR2在上皮性卵巢癌组织中显著高表达,且高表达VEGF的卵巢癌更易发生淋巴转移,VEGF及VEGFR1和VEGFR2与肿瘤分期、腹水产生有着密切关系。预后分析中共高表达VEGF及其受体VEGFR1和VEGFR2的患者预后较差,VEGF及其受体VEGFR1、VEGFR2三者共高表达不仅可作为卵巢癌患者预后的参考指标,也可成为抗肿瘤血管生成靶向治疗疗效的预测指标,即贝伐珠单抗应用于三者共高表达的患者较三者不表达或低表达的患者可能具有更佳的治疗效果。2)人卵巢癌细胞株SKOV3中存在VEGF自分泌机制,rh VEGF对SKOV3有促增殖作用,也使肿瘤细胞表面受体KDR及p-KDR表达增高。VEGF可激活胞内p-KDR,进一步活化自分泌环路的下游信号。3)Bevacizumab通过阻断SKOV3细胞VEGF自分泌环路而降低表面受体KDR及p-KDR的表达,同时Bevacizumab可能通过间接抑制KDR下游信号分子erk及p-erk的表达而抑制细胞VEGF自分泌功能,进一步证明Bev可通过抑制VEGF自分泌机制中的MAPK通路而抑制SKOV3细胞的增殖。
【关键词】：卵巢癌 VEGF VEGFR1(Flt-1) VEGFR2(KDR) Bevacizumab(Bev)
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31
【目录】：
- 缩略语表4-6
- 中文摘要6-9
- Abstract9-12
- 前言12-14
- 文献回顾14-27
- 第一部分VEGF及其受体VEGFR1、VEGFR2在上皮性卵巢癌组织中的表达及临床预后研究27-37
- 1.材料27-28
- 2 方法28-30
- 3 结果30-35
- 4 讨论35-37
- 第二部分 上皮性卵巢癌细胞VEGF自分泌机制研究37-53
- 1 材料37-40
- 2 方法40-46
- 3 统计学处理46
- 4 结果46-51
- 5 讨论51-53
- 第三部分Bevacizumab（Bev）对上皮性卵巢癌细胞增殖影响及机制研究53-62
- 1 材料53-54
- 2 方法54-56
- 3 统计学分析56
- 4 结果56-60
- 5 结论60-62
- 小结62-63
- 参考文献63-73
- 个人简历及研究成果73-75
- 致谢75
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本文编号：438899
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