二甲双胍对子宫内膜癌Ishikawa细胞抑制作用及其机制的研究

发布时间：2017-06-11 17:06

  本文关键词：二甲双胍对子宫内膜癌Ishikawa细胞抑制作用及其机制的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:通过观察二甲双胍(Merformin)对于子宫内膜癌Ishikawa细胞系中的REDD1(发育及DNA损伤反应调节基因1)、p-AKT ser473(473丝氨酸残基磷酸化AKT)、AKT(蛋白激酶B)蛋白表达、AKT蛋白磷酸化程度和REDD1、AKT、mTOR(哺乳动物雷帕霉素靶蛋白)mRNA水平的影响进行分析,并对可能存在的REDD1及AKT/mTOR信号通路之间的相互作用与影响进行研究,探讨二甲双胍对于子宫内膜癌Ishikawa细胞迁移能力的影响及REDD1、p-AKT及mTOR信号分子在其中发挥的作用。方法:选取适量子宫内膜癌Ishikawa细胞株置于37℃、5%CO2环境的培养箱内进行复苏培养,采用含有10%FBS的RPMI1640培养液进行细胞培养,当细胞达到汇片程度时,按照5×105个/瓶将细胞接种于25cm2的培养瓶中,观察Ishikawa细胞的生长情况,以后每隔2天更换一次细胞培养液。当Ishikawa细胞的体积达到90%以后,将其放置于不含有血清的RPMI1640培养液中培养12h,再分别使用1mmol/L、5mmol/L和10mmol/L的二甲双胍进行药物干预48h。同时使用等体积无血清的RPMI1640培养液作为对照组。将Ishikawa细胞按照不同干预分组进行Transwell迁移小室和细胞划痕法检测,以了解不同浓度二甲双胍对Ishikawa细胞迁移能力影响的差异,同时提取各组细胞的RNA及总蛋白,分别采用实时荧光定量PCR和Westem-blot蛋白电泳对各组REDD1、AKT、mTOR mRNA表达、REDD1、AKT、p-AKT蛋白表达的程度进行检测。结果:1、二甲双胍能够明显抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞的迁移能力,同时其抑制程度随着二甲双胍浓度增加而增大,当二甲双胍浓度达到10mmol/L时,其对细胞迁移能力的抑制作用最强,差异有统计学意义(P0.05)。2、不同浓度的二甲双胍作用于Ishikawa细胞以后,能明显提高REDD1/mTOR信号通路中REDD1的表达,分别是对照组的2.97倍、3.25倍、4.87倍,二甲双胍浓度1mmol/L组与对照组、10mmol/L组与其它组之间差异有统计学意义(P0.05)。AKT mRNA的表达分别是对照组的1.10倍、1.02倍、1.00倍,差异没有统计学意义(P0.05)。同时能明显下调其下游mTOR基因的表达,分别是对照组的0.70倍、0.54倍、0.37倍,二甲双胍浓度1mmol/L组与对照组、10mmol/L组与其它组之间差异有统计学意义(P0.05)。3、二甲双胍能够明显增加REDD1/AKT/mTOR信号通路中的REDD1蛋白的表达,同时还可对AKT磷酸化水平即p-AKT蛋白的表达进行抑制,但对AKT蛋白的表达无明显影响。p-AKT的表达分别是对照组的0.70倍、0.51倍、0.20倍,而且10mmol/L组的二甲双胍抑制能力最强,差异具有统计学意义(P0.05)。REDD1蛋白的表达分别为对照组的3.05倍、5.51倍、11.92倍,也呈现出剂量依赖的趋势,差异有统计学意义(P0.05)。AKT的磷酸化水平(P-AKT/AKT比值)也有较明显的下降,AKT的磷酸化水平分别是对照组的0.62倍、0.36倍、0.15倍。AKT蛋白的表达分别是对照组的1.06倍、1.03倍、1.07倍,差异没有统计学意义(P0.05)。结论:二甲双胍在作用于子宫内膜癌Ishikawa细胞后,可以抑制子宫内膜癌细胞的迁移能力,且抑制程度随着二甲双胍浓度的上升而增强;能够上调子宫内膜癌细胞内REDD1的表达,抑制mTOR表达,同时还可下调AKT磷酸化水平,这些效应均具有剂量依赖性。而REDD1/mTOR与AKT/mTOR信号通路可能是调节子宫内膜癌细胞迁移侵袭能力的关键细胞信号网络靶点。二甲双胍可能通过REDD1及AKT/mTOR信号通路的交互作用来抑制REDD1的表达,下调AKT的磷酸化水平进而抑制mTOR的表达,最终发挥出二甲双胍在Ishikawa细胞系中的抗肿瘤细胞迁移侵袭的作用。
【关键词】：二甲双胍 人子宫内膜癌 细胞迁移 REDD1 mTOR信号通路 AKT磷酸化
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 中英缩略词表10-11
• 第1章 前言11-15
• 第2章 材料与方法15-28
• 2.1 主要耗材及试剂15-17
• 2.1.1 实验用细胞及干预药物15
• 2.1.2 主要试剂及其产地15-16
• 2.1.3 主要仪器设备及产地16-17
• 2.2 实验具体方法17-28
• 2.2.1 细胞培养用品及液体的配制17-19
• 2.2.2 细胞培养方法19-20
• 2.2.3 分组及药物干预20
• 2.2.4 Ishikawa细胞迁移能力检测20-21
• 2.2.5 实时荧光定量PCR检测mRNA表达21-24
• 2.2.6 Western blot检测蛋白表达24-27
• 2.2.7 数据处理27-28
• 第3章 结果28-35
• 3.1 二甲双胍对子宫内膜癌Ishikawa细胞迁移的影响28-31
• 3.1.1 二甲双胍对子宫内膜癌Ishikawa细胞Transwell assay小室穿越迁移能力的影响28-30
• 3.1.2 细胞划痕法(Wound healing assay)检测二甲双胍对子宫内膜癌Ishikawa细胞爬行迁移能力的影响30-31
• 3.2 二甲双胍对子宫内膜癌Ishikawa细胞REDD1及AKT/mTOR信号通路的影响31-35
• 3.2.1 二甲双胍对子宫内膜癌Ishikawa细胞REDD1及AKT/mTOR信号通路中相关蛋白表达和磷酸化水平的影响31-33
• 3.2.2 实时荧光定量PCR检测二甲双胍对子宫内膜癌Ishikawa细胞REDD1及AKT/mTOR信号通路中相关基因表达的影响33-35
• 第4章 讨论35-41
• 第5章 结论与展望41-43
• 5.1 结论41
• 5.2 展望41-43
• 致谢43-44
• 参考文献44-54
• 攻读学位期间的研究成果54-55
• 综述55-61
• 参考文献58-61

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 王梦莹;秦淑兰;赖晓阳;;二甲双胍对人子宫内膜癌细胞增殖的影响及其机制[J];山东医药;2016年01期

2 牛慧彦;李慧;王佳贺;张萌;张毅;何平;;RhoGDI2与PI3K/Akt/mTOR信号通路在肺癌细胞中的相关性研究[J];中国组织化学与细胞化学杂志;2011年02期

3 ;Metformin induces apoptosis of pancreatic cancer cells[J];World Journal of Gastroenterology;2008年47期

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本文编号：442048