超声联合微泡增强宫颈癌对化疗药物敏感性的实验及临床研究

发布时间：2017-06-23 08:09

  本文关键词：超声联合微泡增强宫颈癌对化疗药物敏感性的实验及临床研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：宫颈癌(cervical carcinoma,CC)是女性常见恶性肿瘤,其发病率高,全球年新增发病例数460,000,其中发展中国家占80%以上。宫颈肿瘤多发生于40-70岁的中老年围绝经期妇女,但近年来,宫颈癌发病日趋年轻化,20-30岁育龄期妇女也较常见;其组织病理类型中宫颈鳞状细胞癌占80%以上,宫颈腺癌及腺鳞癌发病率也逐渐增高。宫颈癌患者多表现为阴道不规则出血、同房后出血,也有少数患者无明显症状,在健康体检中发现。宫颈肿瘤多由HPV病毒感染引起,根据肿瘤分期,治疗方法采取手术、放疗及化疗的综合治疗,早期发现并合理施治能提高患者生存率,改善预后;随着生活水平的提高及宫颈肿瘤发病的年轻化趋势,更多患者渴求保留子宫甚至保留生育功能;因此宫颈癌的诊疗不仅要求规范化,更需要个体化。大量临床实验发现,中晚期宫颈癌患者在实施新辅助化疗后,肿瘤缓解率增高,新辅助化疗后手术切除率明显增高,达48-100%,患者5年生存率约为83%,但肿瘤耐药及化疗药物的毒副作用使术前化疗的临床应用受到限制。本课题组前期研究发现,不同强度、不同频率的超声波联合微泡介导的超声空化效应能对肿瘤内部微小血管产生不同程度的影响,高声压超声波多数造成血管内皮细胞的损伤,微血栓形成,血管壁通透性增高,低声压超声波可使肿瘤血管扩张,血流速度增快,肿瘤血流灌注增加。为进一步深入研究超声联合微泡对肿瘤化疗的增敏作用及其机制,我们运用低频率低声压超声联合微泡辅助顺铂作用于宫颈癌He La细胞,通过对肿瘤细胞增殖活性及凋亡水平的影响,推测超声联合微泡在一定程度上能增强化疗药物的作用,造成细胞增殖减缓,促使细胞凋亡增加;为进一步证实超声增敏临床术前化疗的作用,我们对10例行新辅助化疗的宫颈癌患者给予诊断超声联合微泡及双氧水的增敏治疗,同时选取29例IIA-IIB期行新辅助化疗的宫颈癌患者作为对照组,比较两组患者新辅助化疗前后宫颈及宫颈肿块的大小改变,对10例行超声治疗的宫颈癌患者进行治疗前后超声造影,观察超声治疗前后宫颈肿块的血流灌注改变情况,经化疗后的患者部分进行子宫完全切除手术,对宫颈癌肌层浸润深度进行病理学评价,宫颈肌层无癌细胞浸润=0分,肿瘤细胞浸润肌层1/2=1分,肿瘤细胞浸润肌层1/2=2分,浸润肌层全层=3分,比较试验组与对照组病理评分,研究结果初步显示超声联合微泡及双氧水能明显改变宫颈肿瘤的血流灌注状态,有使宫颈肿瘤术后病理完全缓解率增加的趋势。实验方法:第一部分:首先测定顺铂对宫颈癌Hela细胞的毒性作用,在一定浓度顺铂作用下,对空白对照组(C),单纯顺铂组(P),超声微泡组(UM),顺铂超声组(PU),超声微泡顺铂组(PUM)的Hela细胞进行相应处理后,使用CCK-8对细胞增殖活性进行检测,进行Annexin-FITC/PI双染色,运用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,通过Hochest33342染色,在荧光显微镜下观察并计数各组细胞凋亡的形态学改变。第二部分:选取10例IIa-IIb经病理学确诊的宫颈癌患者,同时选取近期在本院进行治疗的29例同期别宫颈癌患者作为对照组,患者的治疗方案均为紫杉醇联合奈达铂的宫颈癌新辅助化疗后实施子宫全切术,对试验组的10例患者在化疗过程中进行超声联合微泡及双氧水的增敏治疗,选取两种不同的超声辐照模式,B-MODE辐照模式和Flash辐照模式进行治疗,根据化疗周期,每位患者进行2-4次增敏治疗,并在超声治疗前后行宫颈肿瘤超声造影,并通过TIC曲线定量分析宫颈肿瘤的多组超声造影参数(PI,AUC,TP,MTT),比较两组患者新辅助化疗前后宫颈及宫颈肿瘤的大小改变,通过造影参数评估超声增敏治疗前后宫颈血流灌注的改变情况,化疗后部分患者行子宫全切除术,通过术后病理标本对试验组与对照组进行定性定量评价。实验结果:1.超声联合微泡能使肿瘤细胞增殖速率减慢,凋亡增加(1)通过终浓度抑制率回归曲线图计算得出顺铂的IC50为4.822μg/ml。(2)空白对照组(C)和超声微泡组(UM)的细胞在24h、48h、72h、96h生长趋势无明显差异,超声+微泡+顺铂组(PUM)的生长明显受到抑制,增殖速度减慢。(3)超声+微泡+顺铂组(PUM)在处理后24h的凋亡率为58.1%,单纯顺铂组(P)和顺铂+超声组(PU)凋亡率分别为25.3%和41.5%,空白对照组(C)和超声+微泡组(UM)凋亡不明显;(4)Hoechst33342染色后通过荧光显微镜观察,PUM组细胞约50%呈胞核致密浓染的固缩状态,胞核蓝染高亮,形成凋亡小体。2.超声联合微泡及双氧水增敏宫颈癌化疗(1)宫颈肿瘤在新辅助化疗后,试验组和对照组宫颈肿块均明显缩小,试验组宫颈肿块最大径线由40.90mm缩小至11.43mm,但两组间比较无明显差异;(2)超声造影参数分析,B-MODE治疗模式下,超声治疗后宫颈肿瘤造影显示峰值强度(PI),曲线下面积(AUC)均增高;Flash治疗模式下,超声治疗后宫颈肿瘤造影显示:达峰时间(TP),平均渡越时间(MTT)均明显延长。(3)通过分析超声造影图像,使用B-MODE超声治疗模式下,可见宫颈肿瘤血流灌注明显增加,血流灌注强度增强;在Flash超声治疗模式下,部分宫颈肿瘤出现治疗后出现血流灌注减慢,峰值强度减低,平均渡越时间及达峰时间延长,也可见部分患者出现血流灌注增加。(4)病理结果,试验组(n=10):0分3例(30%)、1分4例(40%)、2分3例(30%)、3分0例;对照组(n=29)有0分3例(10.3%)、1分7例(24%)、2分15例(51%)、3分4例(13.7%)。采用fisher确切概率法对病理结果是否完全缓解进行分析,得出P=0.06,无统计学差异,但试验组患者中的病理完全缓解率有增加趋势。实验结论:1.低声压低频率超声联合微泡能够增强宫颈癌Hela细胞对顺铂的敏感性,一定程度上抑制肿瘤细胞的增殖活性,诱导肿瘤细胞凋亡增加,有降低并延缓肿瘤细胞耐药性产生的趋势。2.诊断超声联合微泡及双氧水可以明显改变宫颈肿瘤病灶血流灌注强度,血流灌注时间,即超声空化造成的血管效应。该效应可能对宫颈癌化疗产生一定的增敏作用,增强肿瘤对化疗药物敏感性,使肿瘤无癌率明显增加。
【关键词】：超声微泡 增敏治疗 肿瘤化疗 宫颈癌
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 缩略语表5-7
• 中文摘要7-11
• 英文摘要11-14
• 第一章 前言14-17
• 第二章 低频超声联合微泡增强宫颈癌Hela细胞对顺铂敏感性的实验研究17-29
• 1 材料和方法17-22
• 2 结果22-24
• 3 讨论24-25
• 4 总结25-29
• 第三章 诊断超声联合微泡及双氧水增敏宫颈癌化疗的临床研究29-40
• 1 资料和方法30-34
• 2 结果34-37
• 3 讨论37-39
• 4 总结39-40
• 全文总结40-41
• 参考文献41-43
• 附录43-44
• 致谢44-45
• 文献综述45-54
• 参考文献52-54

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

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  本文关键词：超声联合微泡增强宫颈癌对化疗药物敏感性的实验及临床研究，由笔耕文化传播整理发布。

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本文编号：474382