RNAi干扰NOB1基因对人卵巢癌细胞SKOV3生长影响的体外研究

发布时间：2017-06-25 23:18

  本文关键词：RNAi干扰NOB1基因对人卵巢癌细胞SKOV3生长影响的体外研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:采用siRNA干扰人NOB1基因后对卵巢癌SKOV3细胞在体外的生长繁殖、细胞周期以及凋亡的作用,深入的探讨NOB1基因在卵巢癌的发生发展中所起的作用,同时为研究人NOB1基因作为肿瘤治疗靶点的分子机制提供新的线索和参考依据。方法:1、将人卵巢癌SKOV3细胞培养至对数期,传代并接种于6孔板中继续培养。2、采用Santa Cruz si RNA Transfection Reagent转染试剂将Control siRNA(Flourescein Conjugate)-A转染至人卵巢癌SKOV3细胞中,统计其转染的效率。3、将细胞分成空白对照组、转染试剂对照组、干扰组和阴性序列对照组,以Santa Cruz siRNA Transfection Reagent转染试剂为载体将阴性对照Control siRNA-A和干扰片段NOB1P siRNA(h)分别转染至人卵巢癌SKOV3细胞中,而后观察各组细胞形态和生长状态。4、采用MTT法检测各组细胞的增殖情况。5、采用RT-PCR方法从检测转染后各组细胞NOB1mRNA的表达情况。6、转染后提取各组的总蛋白,通过Western blotting法检测各组细胞中NOB1蛋白质的表达量。7、用流式细胞仪检测各组的细胞凋亡情况及细胞周期。结果:1、将Control siRNA(Flourescein Conjugate)-A转染至人卵巢癌SKOV3细胞后,发现经转染后的人卵巢癌SKOV3细胞中大多数都有绿色荧光蛋白的表达,且绿色荧光覆盖率80%以上。2、MTT结果显示,NOB1干扰组的人卵巢癌SKOV3细胞增值活力明显降低。3、RT-PCR检测各组NOB1基因mRNA表达量,较其他3组,NOB1干扰组中的NOB1表达量明显降低(P0.05)。4、用Western blotting蛋白免疫印记法检测NOB1蛋白的表达量,相比较于的其他3组,NOB1干扰组中的NOB1表达量明显降低(P0.05)。5、流式细胞仪检测凋亡结果显示NOB1干扰组细胞凋亡率明显升高(P0.05);检测各组细胞周期结果显示,NOB1干扰组的G1期细胞数明显多于其他三组,说明NOB1干扰组的细胞停滞在G1期,难以进入S期。结论:干扰片段NOB1P siRNA(h)可以转染进入人卵巢癌SKOV3细胞中,NOB1P si RNA(h)可以抑制人卵巢癌SKOV3细胞中NOB1基因的表达,且可以抑制人卵巢癌SKOV3细胞的增殖,促进人卵巢癌SKOV3细胞的凋亡并且使其细胞周期阻滞在G1期。
【关键词】：卵巢癌 NOB1 siRNA 细胞增殖 细胞凋亡
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 中文摘要4-6
• abstract6-9
• 英汉缩略词对照表9-10
• 前言10-12
• 1 材料与方法12-35
• 1.1 材料12-19
• 1.2 实验方法19-35
• 1.3 统计学处理35
• 2 结果35-43
• 2.1 转染效率的检测35-36
• 2.2 转染后各组细胞的 NOB1 基因的 m RNA 表达情况36-38
• 2.3 转染后各组细胞的 NOB1 的蛋白表达情况38-40
• 2.4 转染后各组细胞的增殖情况40
• 2.5 转染后各组细胞的凋亡情况40-41
• 2.6 转染后各组细胞的周期情况41-43
• 3 讨论43-48
• 3.1 本课题的重要意义43-44
• 3.2 si RNA 技术的简介44-46
• 3.3 实验结果的分析46-48
• 4 结论48
• 参考文献48-50
• 综述50-54
• 参考文献52-54
• 攻读学位期间发表的学术论文目录54-55
• 致谢55

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