自噬在紫杉醇诱导siha细胞凋亡中的作用

发布时间：2017-06-26 18:02

  本文关键词：自噬在紫杉醇诱导siha细胞凋亡中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：宫颈癌在女性恶性肿瘤的发病率中仅次于乳腺癌，，是女性生殖器官最常见的恶性肿瘤。宫颈癌的临床治疗手段主要以手术和放疗为主，辅以化疗。尽管治疗手段得到不断地改进，但是晚期患者生存率并没有显著提高，同时近几年来宫颈癌发病群体低龄化趋势越来越明显、以手术和放疗为主的治疗方法的对卵巢功能的影响较大及新辅助化疗（NACT）的临床效果比较明显，现阶段宫颈癌的化疗越来越受到关注。作为宫颈癌一线化疗药物的紫杉醇已经证实在引起多种肿瘤细胞凋亡的同时还可以引起肿瘤细胞的自噬，由于自噬的两面性，本实验初步探讨自噬在紫杉醇诱导siha细胞凋亡中的作用和机制，希望能够为宫颈癌的临床化疗进行新的优化。 目的：采用人宫颈癌siha细胞为研究对象，探讨自噬在紫杉醇诱导siha细胞凋亡中的作用和机制。为临床宫颈癌化疗方案的优化以及新的治疗切入点的探索提供合理的理论基础及依据。 方法:本实验采用体外培养人宫颈鳞癌siha细胞株，进行以下研究。 1、通过MTT比色法检测紫杉醇诱导宫颈癌Siha细胞的死亡情况，并初步探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）对该种死亡的作用。 2、通过流式细胞术进一步检测紫杉醇诱导宫颈癌Siha细胞的凋亡以及3-MA对该种细胞死亡的影响。 3、通过吖啶橙染色(AO染色)证明紫杉醇诱导宫颈癌Siha细胞死亡的过程中伴随着自噬产生。 4、通过蛋白印迹证明紫杉醇诱导宫颈癌Siha细胞死亡的过程中自噬相关蛋白LC3表达情况以及3-MA对其的影响。实验结果均采用SPSS16.0统计软件进行数据的统计和分析，并以P＜0.05表示实验数据的差异有统计学意义。 实验结果: 1、MTT实验结果证实：紫杉醇作用siha细胞24h后与对照组比较，紫杉醇1μmol/L组、紫杉醇2μmol/L组细胞生存率明显降低（p0.05），并且呈浓度依赖性（p0.05），紫杉醇+3-MA组与紫杉醇组比较，细胞生存率降低,并有统计学差异（p0.05）。 2、流式细胞术结果进一步证实了上述MTT结果。 3、吖啶橙染色的实验结果显示：荧光显微镜下紫杉醇组、紫杉醇+3-MA组与Control组及Control+3-MA组相比，细胞胞浆中嗜酸性红色荧光颗粒明显增多，紫杉醇+3-MA组与紫杉醇组相比胞浆内嗜酸性红色荧光颗粒明显减少。 4、蛋白印迹结果显示：紫杉醇组、紫杉醇+3-MA组与Control组相比自噬蛋白LC3表达明显升高，并且呈浓度依赖性（p0.05）。紫杉醇+3-MA组与紫杉醇组相比自噬蛋白LC3表达明显降低。 实验结论: 1、紫杉醇可使siha细胞凋亡，并且产生自噬，这种自噬是保护性的，是宫颈癌siha细胞产生耐药的一种重要因素。 2、抑制自噬能够增强紫杉醇对宫颈癌细胞的杀伤作用,为自噬抑制剂增强宫颈癌化疗敏感性提供理论依据。
【关键词】：自噬 siha细胞 宫颈癌 紫杉醇
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 前言4-7
• 摘要7-10
• Abstract10-16
• 英文缩写词表16-18
• 第1章 引言18-19
• 第2章 综述19-25
• 2.1 自噬的概念及生物学意义19-21
• 2.2 自噬与凋亡21-23
• 2.3 自噬与紫杉醇23-24
• 2.4 自噬抑制剂 3-甲基腺嘌呤（3-MA）24
• 2.5 自噬与宫颈癌24-25
• 第3章 材料与方法25-35
• 3.1 实验材料25-29
• 3.1.1 细胞株和主要试剂25
• 3.1.2 主要试剂的配制25-27
• 3.1.3 实验设备27-29
• 3.2 实验方法29-35
• 3.2.1 细胞培养29
• 3.2.2 MTT 法测细胞生存率29-30
• 3.2.3 流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡及 3MA 对在紫杉醇诱导 siha 细胞凋亡中的作用30-32
• 3.2.4 AO（吖啶橙）染色检测紫杉醇诱导 siha 细胞自噬，以及3MA 对其的影响32-33
• 3.2.5 Western 蛋白印迹实验检测 LC3 蛋白表达量33-35
• 3.3 统计学分析35
• 第4章 实验结果35-39
• 4.1 MTT 法检测细胞生存率35
• 4.2 流式细胞术进一步检测紫杉醇诱导宫颈癌 Siha 细胞的凋亡及 3-MA 对其的影响35-36
• 4.3 吖啶橙染色实验结果36-38
• 4.4 Western 蛋白印迹实验检测 LC3 蛋白表达量38-39
• 第五章 讨论39-41
• 第六章 结论41-42
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果42-43
• 致谢43-44
• 参考文献44-48

【参考文献】

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1 孙阳;晋龙;刘佳华;林赛梅;杨茵;眭玉霞;石红;;细胞自噬对紫杉醇诱导宫颈癌CaSki细胞死亡的影响(英文)[J];中南大学学报(医学版);2010年06期

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本文编号：487033