Twist基因诱导绒癌细胞上皮—间质转化的研究

发布时间：2017-06-29 01:17

  本文关键词：Twist基因诱导绒癌细胞上皮—间质转化的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:绒毛膜癌(choriocarcinoma)简称绒癌(CC),在妊娠滋养细胞疾病中(gestational trophoblastic disease,GTD)恶性程度居于首位。其可继发于包括足月分娩、异位妊娠、自然流产以及葡萄胎在内的各种类型的妊娠。绒癌在女性生殖系统肿瘤中发病率虽不及宫颈癌、卵巢癌及子宫内膜癌,但其发展迅速,早期即可转移至肺、脑等重要脏器,恶性程度极高,严重危害着广大女性的生命健康。因其对化疗药物极其敏感,绒癌成为首个能够通过化疗治愈的妇科实体肿瘤。但由于化疗药物种类及化疗方案的选择不当,常导致肿瘤细胞耐药的情形产生,使之成为化疗失败的最主要原因。滋养细胞肿瘤的发病与多方面因素有关,发病机制尚未明确,因此关于其发生、发展及耐药方面的研究一直是人们广泛关注的话题。现已证实上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)与多种上皮性恶性肿瘤的局部浸润以及远处转移密切相关。Twist基因是碱性螺旋-环-螺旋(basic Helix-Loop-Helix,b HLH)转录因子家族的成员之一,1983年被Thisse等在研究果蝇胚胎发育时初次发现,在转移性肿瘤中Twist基因的过度表达非常常见。在对多种肿瘤的研究中发现,Twist基因是肿瘤细胞发生上皮-间质转化(EMT),并获得迁徙、侵袭和转移能力的主要诱导因子之一。本研究探讨Twist基因在人绒毛膜癌JEG-3细胞中的过表达对绒癌细胞增殖能力及对上皮细胞标志物E-cadherin、间质细胞标记物N-cadherin的影响,说明Twist基因在绒癌发生发展中的作用,从另一方面阐明绒癌的发病机制,为绒癌的早期诊断和治疗提供更可靠的理论依据,以期制定个性化治疗方案。方法:1细胞培养:人绒毛膜癌JEG-3细胞株于37℃,5%CO2培养箱中常规培养,使其保持良好的细胞生长状态;2分组:(1)实验组—转染p EGFP-N1-Twist特异性质粒;(2)阴性对照组—转染空载质粒;(3)脂质体对照组—转染LipofectamineTM2000脂质体转染试剂;(4)空白对照组—常规培养不予转染;3倒置相差显微镜观察转染后各组细胞的形态变化;4 CCK-8法检测0小时、24小时、48小时、72小时及96小时实验组和各对照组JEG-3细胞的增殖速度;5 Realtime-q PCR法检测各组人绒毛膜癌JEG-3细胞转染48小时后Twist-m RNA的表达水平;6 Western blot方法检测转染48小时后各组人绒毛膜癌JEG-3细胞中上皮细胞标志物E-cadherin、间质细胞标记物N-cadherin的表达量;7统计方法:应用SPSS13.0统计分析软件对实验数据进行分析,各组数据以??±s表示,多组间均数比较采用单因素方差分析,组间差异选用SNK/LSD法,以P0.05表示差异具有显著性,所有实验结果均重复3次。结果:1细胞形态学变化:JEG-3细胞呈圆形或多边形生长,细胞轮廓清晰,转染48小时后细胞形态呈多角形或不规则形,大片状生长,边界不清。2 CCK-8法检测各组细胞的增殖能力:0小时:实验组0.143±0.003,阴性对照组0.138±0.003,脂质体对照组0.143±0.003,空白对照组0.139±0.002,各组之间相比P0.05,差异无统计学意义,即各组细胞增殖能力相近;24小时:实验组0.248±0.002与阴性对照组0.244±0.007相比P0.05,差异无统计学意义,增殖能力相似;实验组0.248±0.002与脂质体对照组0.193±0.004及空白对照组0.221±0.010相比,P0.05,差异有统计学意义,即实验组增殖能力较快;48小时:阴性对照组0.417±0.003,脂质体对照组0.407±0.011,空白对照组0.418±0.009相比P0.05,差异无统计学意义,增殖能力相近;而实验组0.515±0.002增殖能力明显高于其余3个对照组,P0.05,差异有统计学意义;72小时:细胞增殖能力实验组0.988±0.021空白对照组0.781±0.016阴性对照组0.617±0.003脂质体对照组0.515±0.013,P0.05,差异有统计学意义;96小时:各组细胞增殖趋势与72小时相似,实验组1.411±0.005空白对照组1.293±0.003阴性对照组1.163±0.006脂质体对照组0.801±0.005,P0.05,差异有统计学意义。3 Realtime-q PCR实验检测各组细胞转染48小时后Twist-m RNA的表达水平:实验组2.074±0.025;阴性对照组1.093±0.011;脂质体对照组1.055±0.025;空白对照组1.002±0.021;实验组分别与阴性对照组、脂质体对照组和空白对照组比较,P0.05,差异有统计学意义,即实验组Twist-m RNA表达量明显升高。阴性对照组与脂质体对照组Twist-m RNA的表达量对比P0.05,差异无统计学意义。4 Western-blot方法检测各组细胞中E-cadherin、N-cadherin的表达情况:转染48小时后,各组细胞中E-cadherin的表达为:实验组0.273±0.045,阴性对照组0.645±0.020,脂质体对照组0.594±0.031,空白对照组0.390±0.034;实验组与各对照组相比,P0.05,差异有统计学意义,实验组较其他对照组组明显降低;各组细胞N-cadherin的表达为:实验组0.679±0.032,阴性对照组0.578±0.030,脂质体对照组0.576±0.013,空白对照组0.581±0.020;实验组与各对照组相比,P0.05,差异有统计学意义,即实验组较阴性对照组、脂质体对照组和空白对照组N-cadherin表达显著升高。而3个对照组之间两两比较,P0.05,E-cadherin蛋白、N-cadherin蛋白表达量均无显著性差异。结论:1Twist基因过表达可使人绒毛膜癌JEG-3细胞发生形态学改变,由圆形变为多角形和不规则形,轮廓不清楚,呈现出间质细胞的表型特征,使绒癌细胞更具有恶性侵袭力。2Twist基因过表达可增加人绒毛膜癌JEG-3细胞的增殖能力。3Twist基因在人绒毛膜癌JEG-3细胞中的过表达可导致N-cadherin的表达增高,E-cadherin的表达降低,说明Twist基因通过细胞上皮-间质转化机制参与了绒癌的发生发展过程。
【关键词】：Twist基因 绒毛膜癌 JEG-3细胞 上皮-间质转化 E-cadherin N-cadherin
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-12
• 英文缩写12-13
• 前言13-14
• 材料与方法14-26
• 结果26-28
• 附图28-31
• 附表31-33
• 讨论33-36
• 结论36-37
• 参考文献37-41
• 综述Twist基因与妇科恶性肿瘤上皮-间质转化的研究进展41-48
• 参考文献44-48
• 致谢48-49
• 个人简历49

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

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本文编号：496046