雌激素结合不同受体差异性调控A2780细胞株中miR-214的表达

发布时间：2017-07-06 00:12

  本文关键词：雌激素结合不同受体差异性调控A2780细胞株中miR-214的表达

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【摘要】：[目的]探讨在人卵巢上皮性癌细胞株A2780中,雌激素通过结合不同的雌激素受体,差异性调控miR-214的表达。[方法]1、构建ER α及ERβ高表达载体,培养A2780细胞株。将培养好的细胞分为a、b、c三组。a组将ER α过表达载体通过慢病毒感染A2780细胞；b组将ERβ过表达载体通过慢病毒感染A2780细胞；c组将未处理的A2780细胞作为对照组。2、慢病毒感染A2780细胞24小时,RT-PCR及Western Blot检测a、b、c三组细胞感染前后ER α、ERβ mRNA及蛋白的表达水平。3、慢病毒感染A2780细胞24小时后,RT-PCR检测三组细胞miR-214的表达水平。4、10-6mol/L的17-β雌二醇刺激各组细胞24小时后,RT-PCR检测a、b、c三组细胞内miR-214的表达水平。5、先添加100nM的雌激素受体拮抗剂(ICI182,780)处理各组细胞6小时后再添加10-6mol/L的17-β雌二醇处理12小时,RT-PCR检测三组细胞内miR-214表达水平。[结果]1、慢病毒感染A2780细胞24小时后,RT-PCR检测a组细胞ER α mRNA 2-ΔΔCt为7931.25±65.81较c组53.76±6.09明显升高(P0.01)。b组ERβmRNA为100.66±15.72,较c组15.34±2.25明显升高(P0.01)。2、Western Blot检测a组细胞ERα/β-actin为1.77±0.25较c组1.14±0.18明显升高(P0.05)。b组ERβ/β-actin为0.82±0.04,较c组0.65±0.06明显升高(P0.05)。3、RT-PCR检测慢病毒感染细胞24h后,在17-β雌二醇刺激之前,各组细胞内miR-214的相对表达水平,miR-214的相对表达分别为0.18±0.05,0.17±0.03,0.14±0.04,差异无统计学意义(P0.05)4、RT-PCR检测10-6mol/L 17-β雌二醇刺激三组细胞24小时后,a组miR-214的相对表达2-ΔΔCt值为0.038±0.014,较c组0.144±0.045明显降低(P0.05),b组为1.325±0.643,较c组明显升高(P0.05)。5.RT-PC检测(ICI182、780)处理各组细胞后,a、b、c三组细胞内miR-214的相对表达2-ΔΔCt值分别为0.305±0.024,0.292±0.017,0.266±0.013三组对比无明显差异(P0.05)。[结论]1、通过慢病毒介导ER α及ER β过表达载体后感染A2780细胞的方法,我们成功建立了高表达ER α及ER β的卵巢癌细胞株,为后续的研究奠定了基础。2、在没有雌激素刺激时,慢病毒介导过表达载体感染A2780细胞不影响miR-214的表达。3、细胞内高表达ERα,雌激素能够降低细胞内miR-214的表达。4、细胞内高表达ERβ,雌激素能够促进细胞内miR-214的表达。5、雌激素受体拮抗剂能够抑制雌激素对miR-214表达的调控作用,证明雌激素对miR-214表达的差异性调控是由不同的雌激素受体介导的。6、以上结论证实雌激素通过结合不同受体能差异性调控卵巢癌A2780细胞内靶基因miR-214的表达。也许能为寻找卵巢癌的发病机制提供新的理论依据,也可能为卵巢癌的靶向治疗提供新的思路。
【关键词】：雌激素 雌激素受体α 雌激素受体β 卵巢癌 miR-214
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 缩略词表(以字母顺序排列)5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-14
• 材料与方法14-24
• 结果24-28
• 讨论28-33
• 结论33-34
• 参考文献34-39
• 综述39-48
• 参考文献44-48
• 攻读学位期间获得的学术成果48-49
• 致谢49

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