LIN28A和PLK4在卵巢上皮性癌中的表达及其意义

发布时间：2017-07-06 17:25

  本文关键词：LIN28A和PLK4在卵巢上皮性癌中的表达及其意义

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【摘要】：目的:本研究通过检测LIN28A和PLK4在不同卵巢细胞系和组织中的表达情况,探讨LIN28A、PLK4与卵巢上皮性癌之间的关系以及二者的关系,为进一步研究LIN28A、PLK4在卵巢癌发生、发展中的作用机制,以及分子靶向治疗卵巢癌奠定实验研究基础。方法:(1)荧光定量PCR技术(real time quantitative PCR,q-PCR)以及免疫印迹技术(western bolt,WB)检测不同卵巢上皮性癌细胞系及卵巢上皮细胞系中LIN28A和PLK4 m RNA及蛋白的表达水平。(2)分别将LIN28A质粒、PLK4质粒单独以及共转染进293T细胞,显微镜观察各组细胞生长情况;q-PCR和WB检测不同转染处理后的细胞系中LIN28A和PLK4的m RNA和蛋白水平。(3)q-PCR检测临床术后收集的不同性质卵巢组织中LIN28A和PLK4的m RNA表达水平。收集2009年至2014年间江苏大学附属医院以及江苏大学附属人民医院术后存档的79个卵巢组织病理蜡块,根据组织性质分成良性组以及卵巢癌组,并收集各个患者的临床资料,进行术后随访。每组进行病理切片,行免疫组化染色,检测不同组织中LIN28A以及PLK4蛋白的表达水平。统计分析LIN28A以及PLK4的蛋白水平与卵巢癌临床指标、患者预后的关系以及二者的相关性。结果:(1)LIN28A在A2780和HO8910中的表达水平明显高于Hosepic,PLK4在A2780和SKOV3、HO8910中的表达水平明显高于Hosepic。(2)分别将LIN28A质粒、PLK4质粒单独以及共转染进293T细胞后,LIN28A的表达水平高于质粒对照组;而将PLK4质粒单独以及与LIN28A质粒共转染进293T细胞后,PLK4的表达水平明显较质粒对照组高。将PLK4质粒单独以及与LIN28A质粒共转染进293T细胞后,细胞的增殖较质粒对照组快,而单独转染LIN28A质粒无明显促细胞增殖作用。(3)与卵巢良性肿瘤组相比,卵巢上皮性癌组中LIN28A和PLK4的m RNA表达水平均较高。免疫组织化学染色检测发现:在良性卵巢肿瘤组未检测到LIN28A和PLK4表达,在卵巢上皮性癌组检测到LIN28A和PLK4的阳性表达,两者具有统计学差异(P0.05);LIN28A和PLK4在病理分期越高的卵巢上皮性癌组织中的异常高表达情况越明显(P0.05);PLK4和LIN28A在卵巢上皮性癌组织中的表达呈正相关(r=0.555,P=0.039);影响卵巢上皮性癌患者预后的危险因素有LIN28A、PLK4和病理分期;LIN28A和PLK4同时表达阳性的患者比其他患者的生存时间都短(P0.05)。结论:LIN28A和PLK4与患者预后相关,可以作为卵巢上皮性的标志并可能成为药物治疗的靶点。
【关键词】：卵巢上皮性癌 LIN28A PLK4 预后
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-14
• 第一章 绪论14-26
• 1.1 卵巢上皮性癌（epithelial ovarian cancer, EOC）14-16
• 1.1.1 卵巢癌现状14
• 1.1.2 卵巢癌的病因及治疗14-16
• 1.2 LIN28A（Lin-28 Homologue A）16-19
• 1.2.1 LIN28A简介16
• 1.2.2 LIN28A在细胞生长发育中的作用16-17
• 1.2.3 LIN28A与肿瘤及其干细胞17-19
• 1.3 PLK4（Polo-like kinase 4，Polo样蛋白激酶 4）19-20
• 1.3.1 PLKs简介19
• 1.3.2 PLK4的结构19
• 1.3.3 PLK4的功能19-20
• 1.4 CDC25磷酸酶（Cell division cycle 25 phosphatases，细胞分裂周期蛋白 25）20-22
• 1.4.1 CDC25 与细胞周期的关系20-21
• 1.4.2 CDC25亚型及与肿瘤的关系21
• 1.4.3 CDC25不同亚型的功能及调节21-22
• 1.5 实验的研究目的、方法、实验设计和研究意义22-26
• 1.5.1 研究目的22
• 1.5.2 研究方法22-23
• 1.5.3 实验设计23-24
• 1.5.4 研究意义24-26
• 第二章 LIN28A和PLK4在卵巢上皮性癌中的表达情况26-56
• 2.1 实验材料26-31
• 2.1.1 主要试剂及标本26-27
• 2.1.2 主要溶液的配制27-30
• 2.1.3 主要仪器及耗材30-31
• 2.2 实验方法31-42
• 2.2.1 细胞培养31
• 2.2.2 质粒扩增31-32
• 2.2.3 制备感受态细胞（DH-5α）32
• 2.2.4 质粒转化与质粒抽提32-33
• 2.2.5 转染（ExFect TM Transfection Reagent）33-34
• 2.2.6 细胞系总RNA提取34-35
• 2.2.7 细胞系蛋白质提取35
• 2.2.8 q-PCR35-37
• 2.2.9 免疫印迹（Western Blot, WB）37-38
• 2.2.10 卵巢组织预处理38
• 2.2.11 组织总RNA的提取38-39
• 2.2.12 组织切片39
• 2.2.13 免疫组织化学染色（IHC）39-41
• 2.2.14 HE染色41-42
• 2.2.15 免疫组化结果评估42
• 2.2.16 统计分析方法42
• 2.3 实验结果42-54
• 2.3.1 不同卵巢细胞系中LIN28A和PLK4的表达情况42-44
• 2.3.1.1 不同卵巢细胞系中LIN28A和PLK4 mRNA的表达情况42-43
• 2.3.1.2 不同卵巢细胞系中LIN28A蛋白和PLK蛋白的表达情况43-44
• 2.3.2 经不同转染处理后的四组 293T细胞系中细胞的增殖能力44-46
• 2.3.3 转染不同质粒的 293T细胞系中LIN28A和PLK4的表达情况46-48
• 2.3.3.1 转染不同质粒的 293T细胞系中LIN28A和PLK4 mRNA的表达情况46-47
• 2.3.3.2 经不同转染处理后的 293T细胞系中LIN28A蛋白和PLK4蛋白的表达情况47-48
• 2.3.4 不同性质卵巢组织中LIN28A和PLK4 mRNA的表达情况48-49
• 2.3.5 不同性质卵巢组织中LIN28A和PLK4蛋白水平的表达差异情况49-54
• 2.3.5.1 LIN28A和PLK4在卵巢组织中的表达50-51
• 2.3.5.2 LIN28A和PLK4在卵巢癌组织中的表达情况与不同临床参数的关系51-52
• 2.3.5.3 LIN28A和PLK4在卵巢上皮性癌组织中的阳性表达的相关性52
• 2.3.5.4 单因素和多因素 Logistic 回归分析52-53
• 2.3.5.5 Kaplan-Meier法生存分析53-54
• 2.4 讨论54-56
• 第三章 主要结论和展望56-57
• 3.1 主要结论56
• 3.2 展望56-57
• 参考文献57-64
• 综述：PLK4的研究进展64-74
• 综述参考文献71-74
• 致谢74-75
• 攻读硕士学位期间发表的文章及专利75

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