细菌性阴道病干化学酶法联合试剂盒的研制与性能评估

发布时间：2017-07-15 15:13

  本文关键词：细菌性阴道病干化学酶法联合试剂盒的研制与性能评估

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【摘要】：细菌性阴道病(bacterial vaginosis,简称BV)是妇产科常见疾病,对妇女危害较大,在妇科、产科及施行外科流产术前对BV进行快速有效的诊断具有十分重要的意义。检测BV使用的样本为阴道分泌物,其成分比较复杂,再加上BV本身不是单一细菌而是厌氧菌群感染,这就给BV检测带来很大困难,目前国内临床上尚缺乏快速有效的产品诊断BV。国外开发的BVblue产品,用酶法检测BV使此难题得以突破,但其成本高,漏检、操作复杂等因素影响其在国内的推广应用。为了满足国内对BV快速检测的需求,本论文主要用干化学酶法研制了细菌性阴道病联合试剂盒,以期获得灵敏度好、特异度高、方便、快速、经济的产品,应用于女性阴道疾病BV的诊断。研究方法和结果:1.主要原材料研究:设计了专用反应板、比色卡、对载体、底物、质控品进行筛选,并制定了相应的质量标准。2.主要工艺研究:筛选出4-氨基安替吡啉、唾液酸底物B、L-脯氨酸对硝基苯胺、溴甲酚绿作为过氧化氢、唾液酸苷酶、脯氨酸氨肽酶和pH值指标的底物,通过系列正交实验和优化实验获得每个指标的最佳配方。最终形成了产品的工艺流程图。3.体系研究:样本为阴道分泌物,加样量为30μl,反应时间为37℃15分钟,结果读取时间为温育结束后5分钟内。4.分析性能研究:对三批试剂盒分别进行检测限、特异性、准确性、重复性及批间差的考核,均满足要求。5.稳定性研究:试剂盒37℃加速破坏9天性能符合要求;模拟运输37℃震荡7天性能符合要求;实时稳定性12个月性能符合要求;反应板拆封后可稳定4小时;阴道分泌物样本采集后应在1小时内使用。6.阳性判断标准的确定:检测100份正常样本和各50份过氧化氢、脯氨酸氨基肽酶、唾液酸苷酶阳性样本,使用ROC曲线法确定这3个指标的阳性判断标准。7.临床研究:检测681例临床样本,BVblue试剂盒和Amsel法金标准对比结果有显著性差异,灵敏度为85.58%;本试剂盒唾液酸酶孔结果与BVblue试剂盒结果无明显差异;本试剂盒4个指标联合检测结果与Amsel法金标准对比,灵敏度为98.08%,特异性为99.48%,阳性预测值为97.14%,阴性预测值为99.65%,总符合率为99.27%。因此本试剂盒比BVblue试剂盒检出率高性能更好。结论:自行研制的细菌性阴道病联合试剂盒,方便快捷、性能稳定、灵敏度高、特异性好,能较好的应用于临床BV的诊断。
【关键词】：细菌性阴道病 快速检测 试剂盒开发 工艺研究 性能评估 临床研究
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R711.3
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 第一章 前言12-15
• 第二章 主要原材料研究15-22
• 2.1 实验材料及设备15-16
• 2.1.1 实验材料15
• 2.1.2 实验设备15-16
• 2.2 反应板的设计、制作及质量标准16-17
• 2.2.1 反应板的设计制作16
• 2.2.2 反应板的质量标准16-17
• 2.3 比色卡的设计制作及质量标准的确定17-18
• 2.3.1 比色卡的设计制作17
• 2.3.2 比色卡的质量标准17-18
• 2.4 反应板的载体纸片的选择及质量标准的确定18-19
• 2.4.1 载体纸片的选择18
• 2.4.2 载体纸片的质量标准18-19
• 2.5 底物的选择及质量标准的确定19
• 2.5.1 底物的选择19
• 2.5.2 底物的质量标准19
• 2.6 质控品的选择及质量标准的确定19-22
• 2.6.1 质控品的选择19
• 2.6.2 检测限质控品和阳性质控品19-20
• 2.6.3 特异性质控品20
• 2.6.4 阴性质控品20-22
• 第三章 试剂盒组份制备工艺研究22-31
• 3.1 实验材料及设备22-23
• 3.1.1 新出现的实验材料22
• 3.1.2 新出现实验设备22-23
• 3.2 样品稀释液的制备工艺研究23-24
• 3.2.1 成分的研究23
• 3.2.2 分装量的选择23-24
• 3.3 反应板的制备工艺研究24-31
• 3.3.1 过氧化氢试剂垫成分研究24-25
• 3.3.2 唾液酸苷酶试剂垫成分研究25-28
• 3.3.3 脯氨酸氨基肽酶试剂垫成分研究28
• 3.3.4 pH值试剂垫成分研究28-29
• 3.3.5 试剂垫包被液加样量的选择29
• 3.3.6 试剂垫干燥方法的确定29
• 3.3.7 试剂垫干燥条件确定29-30
• 3.3.8 反应板制备形成工艺流程图：30-31
• 第四章 试剂盒反应体系研究31-37
• 4.1 实验材料及设备31
• 4.1.1 新出现的实验材料31
• 4.1.2 新出现实验设备31
• 4.2 样本要求31-33
• 4.2.1 样本的类型、采集及处理31-32
• 4.2.2 样本中干扰物质32-33
• 4.3 反应模式的确定33-37
• 4.3.1 反应步骤的确定33-34
• 4.3.2 样本用量对比34
• 4.3.3 反应时间的确定34-35
• 4.3.4 颜色判定时间的确定35-37
• 第五章 试剂盒分析性能研究37-42
• 5.1 实验材料及设备37
• 5.1.1 新出现的实验材料37
• 5.1.2 新出现实验设备37
• 5.2 检测限37-38
• 5.3 特异性38
• 5.4 准确度38-39
• 5.4.1 阳性质控品检测结果38-39
• 5.4.2 阴性质控品检测结果39
• 5.5 重复性39-41
• 5.6 批间差41-42
• 第六章 试剂盒稳定性研究42-57
• 6.1 实验材料及设备42-43
• 6.1.1 新出现的实验材料42-43
• 6.1.2 新出现实验设备43
• 6.2 反应板的稳定性研究43
• 6.3 检测限质控品和阳性质控品的稳定性研究43-44
• 6.4 试剂盒的加速稳定性研究44-47
• 6.5 成品试剂盒的模拟运输稳定性研究47-48
• 6.6 试剂盒的拆封稳定性研究48-49
• 6.7 成品试剂盒的实时稳定性研究49-57
• 第七章 试剂盒阳性判断标准研究57-64
• 7.1 建立阳性判断值的方法57
• 7.2 阳性判断值建立的过程与结果57-64
• 7.2.1 过氧化氢指标57-59
• 7.2.2 唾液酸酶指标59-61
• 7.2.3 脯氨酸氨基肽酶指标61-64
• 第八章 试剂盒的临床研究64-69
• 8.1 实验材料及研究方法64-65
• 8.1.1 实验材料64
• 8.1.2 主要仪器设备64
• 8.1.3 样本量64
• 8.1.4 样本的采集及试验设计64-65
• 8.1.5 数据统计分析方法65
• 8.2 临床研究结果及分析65-67
• 8.2.1 过氧化氢孔临床结果65-66
• 8.2.2 唾液酸孔临床结果66
• 8.2.3 BVblue试剂盒临床结果66-67
• 8.2.4 考核试剂评估结果67
• 8.3 结论与讨论67-69
• 结论与讨论69-72
• 参考文献72-75
• 缩略词表75-76
• 个人简历、在学期间发表学术论文及研究成果76-77
• 致谢77

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