内质网应激介导妊娠期慢性应激促进子代成年后海马Aβ形成及维生素D的保护作用

发布时间：2017-07-20 03:18

  本文关键词：内质网应激介导妊娠期慢性应激促进子代成年后海马Aβ形成及维生素D的保护作用

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【摘要】：目的:(1)探讨妊娠期慢性应激是否通过子代海马神经元内质网应激,激活PERK,促使e IF2α磷酸化,引起BACE1 m RNA翻译增加,最终导致BACE1蛋白含量增加,从而促进Aβ的生成。(2)通过给予维生素D并检测子鼠海马组织GRP78、磷酸化的PERK、磷酸化e IF2α蛋白水平。探讨维生素D对妊娠期慢性应激促进子代海马内质网应激是否有抑制作用。方法:以6个月龄的子代APPswe/PS1d E9双转基因小鼠为研究对象,实验小鼠随机分成4组,即产前慢性应激-子代慢性应激组(CPS+COS)、产前慢性应激-子代正常处理组(CPS)、产前正常处理-子代慢性应激组(COS)、产前正常处理-子代正常处理组(对照组)。对于4组的子代小鼠,运用ELISA法测定Aβ1-40和Aβ1-42水平;通过HE染色观察海马CA3区神经元的组织病理形态;采用Morris水迷宫检测空间学习记忆能力;采用荧光酶标记法检测BACE1的活性;采用Western blot法定量检测小鼠海马组织中GRP78、p-e IF2α、淀粉样前体蛋白β位点裂解酶1(BACE1)以及p-PERK的表达量;运用免疫组化的方法,定位、半定量检测海马CA3区葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达状况。在上述实验的基础上,将小鼠随机分为CPS+COS和产前慢性应激-子代慢性应激组-VD灌胃组(CPS+COS+VD)两组,这两组的子代小鼠,采用Y迷宫检测子代小鼠的辨别性工作记忆及参考记忆;采用Western blot法定量检测小鼠海马组织中GRP78、p-e IF2α以及p-PERK的表达量;运用免疫组化的方法,定位、半定量检测海马CA3区GRP78的表达状况。结果:1.ELISA结果显示COS组海马组织Aβ1-40和Aβ1-42表达量较对照组明显增加(P0.05),CPS+COS组海马组织Aβ1-40和Aβ1-42表达量较COS组明显增加(P0.05)。2.HE染色结果显示COS组小鼠海马CA3区损伤的神经元排列疏松紊乱,细胞体略小,核浓染固缩,神经元数目较对照组明显增多(P0.05);CPS+COS组小鼠的海马CA3区损伤的神经元数目较COS组进一步增多(P0.05)。3.水迷宫结果显示COS组小鼠的逃避潜伏期时间和游泳距离较对照组延长(P0.05)、平台象限游泳时间和穿越平台次数较对照组减少(P0.05);CPS+COS组小鼠的逃避潜伏期和游泳距离较COS组明显延长(P0.05)、平台象限游泳时间和穿越平台次数较COS组明显减少(P0.05)。4.荧光酶标法检测结果显示,各组子代鼠海马组织BACE1活性比较差异无统计学意义(P0.05)。5.Western blot结果显示COS组小鼠海马组织GRP78、p-e IF2α、p-PERK和BACE1蛋白的表达量较对照组明显升高(P0.05);CPS+COS组小鼠海马组织GRP78、p-e IF2α、p-PERK和BACE1的表达量较COS组明显升高(P0.05)。6.免疫组化结果显示,COS组小鼠海马CA3区组织GRP78蛋白的表达量较对照组升高(P0.05);CPS+COS组小鼠海马CA3区组织较COS组有更多的GRP78的表达(P0.05)。7.Y迷宫结果显示,CPS+COS+VD组子代鼠进入各臂的次数和进入新臂的时间较CPS+COS组多。8.HE染色结果显示CPS+COS+VD组小鼠海马CA3区神经元排列紧密,神经元数目较CPS+COS组增多,核浓染固缩较CPS+COS组有所减少。9.Western blot和免疫组化结果显示,CPS+COS+VD组的GRP78、p-e IF2α、p-PERK蛋白的表达量较对照组明显减少(P0.05)。结论:1.妊娠期慢性应激可以通过子代长期升高的GCs,引起海马神经元内质网应激,激活PERK,引起e IF2α磷酸化,促进BACE1 m RNA翻译增加,导致BACE1蛋白水平或活性升高,从而促进Aβ的生成,引起或促进淀粉样斑块的形成。2.适度的增补维生素D对妊娠期慢性应激促进子代海马神经元内质网应激有抑制作用。
【关键词】：产前应激 慢性应激 内质网应激 Y迷宫 学习记忆
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R714.2
【目录】：

• 英文缩略词表7-8
• 中文摘要8-10
• 英文摘要10-12
• 1 前言12-14
• 2 材料与方法14-31
• 2.1 材料14-19
• 2.1.1 实验动物14
• 2.1.2 主要仪器（型号）14-15
• 2.1.3 主要试剂15-17
• 2.1.4 主要溶液的配置17-19
• 2.2 实验动物分组和实验方法19-31
• 2.2.1 母代小鼠的饲养、繁殖19-20
• 2.2.2 母代小鼠的产前慢性应激方法20
• 2.2.3 雄性子代小鼠的基因鉴定20-22
• 2.2.4 子代小鼠的饲养及其成人后的慢性应激方法22-23
• 2.2.5 学习记忆能力测试23
• 2.2.6 观察病理改变23-25
• 2.2.7 Western blot法测定海马组织p-e IF2α、p-PERK、GRP78和BACE1的蛋白表达量25-28
• 2.2.8 ELISA法测定海马组织中Aβ1-42和Aβ1-40的含量28-30
• 2.2.9 BACE1活性的测定30
• 2.2.10 统计分析30-31
• 3 结果31-41
• 3.1 产前应激对慢性应激所致子鼠海马Aβ 形成和学习记忆的影响31-34
• 3.1.1 产前应激促进慢性应激所致6月龄雄性APPswe/PS1d E9子鼠海马组织Aβ生成的31
• 3.1.2 产前慢性应激进一步加剧子代慢性应激所致的子鼠海马CA3区神经元损伤31-32
• 3.1.3 产前慢性应激进一步加剧子代慢性应激所致的子鼠学习记忆能力损伤32-34
• 3.2 产前应激促进慢性应激所致的子鼠海马Aβ 形成机理34-37
• 3.2.1 产前应激对子鼠海马组织BACE1的表达量和活性的影响34-35
• 3.2.2 产前应激进一步加剧子代慢性应激所致的子鼠海马GRP78、p-e IF2α、p-PERK表达35-36
• 3.2.3 产前慢性应激进一步加剧子代慢性应激所致的子鼠海马CA3区GRP78和p-e IF2α的表达36-37
• 3.3 维生素D对妊娠期慢性应激促进子代海马Aβ形成有抑制作用37-41
• 3.3.1 Y迷宫37-39
• 3.3.2 生素D对妊娠期慢性应激所致的子鼠海马CA3区神经元损伤的作用39
• 3.3.3 Western blot39-40
• 3.3.4 维生素D对妊娠期慢性应激促进海马CA3区GRP78的表达作用40-41
• 4 讨论41-45
• 5 结论45
• 参考文献45-51
• 附录51-53
• 致谢53-54
• 综述54-66
• 参考文献62-66

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本文编号：566065