胚胎停育绒毛组织中DNA甲基转移酶的表达及临床意义

发布时间：2017-08-08 07:37

  本文关键词：胚胎停育绒毛组织中DNA甲基转移酶的表达及临床意义

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【摘要】：目的:1.检测胚胎停育患者和正常早孕者绒毛组织中DNMT1、DNMT3A、DNMT3B与DNMT3L m RNA及蛋白的表达量及阳性染色定位;2.分析胚胎停育患者和正常早孕者绒毛组织中DNMT1、DNMT3A、DNMT3B与DNMT3L在m RNA水平及蛋白水平的表达差异并探讨其临床意义。方法:随机选取2013年1月至2014年6月在青岛市市立医院妇产科门诊就诊的经B型超声(B超)证实为胚胎停止发育实行清宫术的40例患者为观察组,并选择同时期40例正常早孕而要求终止妊娠者作为对照组,获取两组患者绒毛组织进行研究。1.采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-q PCR)法检测两组患者绒毛组织中DNMT1、DNMT3A、DNMT3B与DNMT3L m RNA的相对表达量。2.用免疫组织化学中链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法(SP法)确定DNMT1、DNMT3A、DNMT3B与DNMT3L蛋白在两组绒毛组织滋养细胞中的染色定位,并用图像分析软件Image-Pro Plus 6.0检测4种蛋白在绒毛组织中的表达量。3.用Western Blot方法进一步检测DNMT1、DNMT3A、DNMT3B与DNMT3L蛋白在两组患者绒毛组织中的表达。4.应用SPSS17.0软件对RT-qPCR、免疫组织化学及Western Blot所得实验结果进行统计学分析,P0.05认为差异有统计学意义。结果:1.两组绒毛组织均表达DNMT1、DNMT3A、DNMT3B与DNMT3L,此外,无论在mRNA水平或蛋白水平,DNMT3B表达量都显著高于其他三种DNMTs。2.在m RNA水平,与对照组相比,胚胎停育患者绒毛组织中DNMT1、DNMT3A、DNMT3B与DNMT3L的表达量均无明显改变,差异无统计学意义(P0.05)。3.在蛋白水平,免疫组织化学染色结果显示,在两组绒毛组织中,四种DNMTs均呈不同程度阳性染色,DNMT1与DNMT3L阳性染色定位在绒毛滋养层细胞的细胞质,DNMT3A与DNMT3B阳性染色定位在细胞核。此外,通过图像分析软件及Western Blot结果显示,胚胎停育患者绒毛中的DNMT3A蛋白的表达量明显低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。4.DNMT1、DNMT3A、DNMT3B与DNMT3L四种蛋白之间表达量无明显关联(P0.05)。结论:1.胚胎停育绒毛组织中DNMT3A蛋白的低表达可能参与胚胎停育的发病机制。2.通过检测胚胎停育患者绒毛组织中DNMTs的表达量可能为临床进行早期干预和治疗提供新的途径。
【关键词】：妊娠初期 胎儿疾病 DNA甲基转移酶 绒毛膜组织
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R714.21
【目录】：

• 摘要2-4
• Abstract4-7
• 引言7-10
• 第一章 实验材料10-14
• 1.1 研究对象及标本采集10
• 1.2 主要仪器设备10-11
• 1.3 主要实验试剂及其配制11-14
• 第二章 实验方法14-24
• 2.1 RT-qPCR方法14-17
• 2.2 免疫组织化学方法17-19
• 2.3 Wewstern Blot方法19-24
• 第三章 实验结果24-27
• 3.1 胚胎停育组和对照组年龄及停经时间比较24
• 3.2 胚胎停育组和对照组绒毛组织中DNMTs mRNA的表达情况24
• 3.3 胚胎停育组和对照组 DNMTs 免疫组织化学染色结果24-25
• 3.4 胚胎停育组和对照组绒毛组织中 DNMTs 蛋白表达变化25-27
• 第四章 讨论27-30
• 第五章 结论30-31
• 参考文献31-34
• 附图34-39
• 综述39-49
• 参考文献45-49
• 攻读学位期间的研究成果49-50
• 致谢50-51

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：638880