土槿乙酸对人子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡、转移的影响及其机制

发布时间：2017-08-10 15:17

  本文关键词：土槿乙酸对人子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡、转移的影响及其机制

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【摘要】：子宫内膜癌是一种常见的生殖道恶性疾病,严重威胁女性的身体健康。子宫内膜癌约占女性生殖道恶性肿瘤的20%～30%,其发病率在世界范围内呈明显上升趋势。约有28%的子宫内膜癌患者在确诊时已经发生局部或远距离转移。传统化疗药物毒副反应较大,对正常细胞也有很强的杀伤作用,尤其是晚期以及复发性的的子宫内膜癌患者的治疗十分棘手。因此,临床上亟需寻找一种毒副作用小,且可抑制肿瘤远端转移的治疗药物。土荆皮是松科植物金钱松(Pseudolarix kaempferi Gord)的干燥根皮或近根树皮,其性温、味辛、归肺、脾经,气微,味苦而涩,有毒,具有杀虫止痒的功效,常用于治疗癣症。土槿乙酸(Pseudolaric acid B, PAB)是从土荆皮中提取的主要成分之一,为二萜酸化合物,分子式为C23H28O8,具有较强的细胞毒作用。实验方法：1.土槿乙酸诱导人子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡的研究。采用常规方法培养Ishikawa细胞,观察给药后的Ishikawa细胞形态学变化；采用MTT实验检测不同浓度和不同给药时间土槿乙酸对Ishikawa细胞增殖的影响并计算IC50值；流式细胞分析术检测不同浓度和不同作用时间土槿乙酸对Ishikawa细胞的周期、凋亡情况的影响。2.土槿乙酸抑制人子宫内膜癌Ishikawa细胞转移的研究。采用平板克隆方法检测不同浓度的土槿乙酸对Ishikawa细胞形成克隆能力的影响；划痕愈合方法检测不同浓度不同时间土槿乙酸作用于Ishikawa细胞后对细胞划痕愈合能力的影响；Transwell培养方法检测不同浓度土槿乙酸对Ishikawa细胞侵袭转移能力的影响。3.土槿乙酸诱导人子宫内膜细胞Ishikawa凋亡及抑制其转移的分子机制。采用Western-Blotting方法在蛋白水平检测不同浓度土槿乙酸作用不同作用时间后,Ishikawa细胞增值信号通路关键蛋白ERK1/2、p-ERK1/2蛋白及肿瘤转移相关蛋白VEGF、MMP9及E-cad等表达情况的变化。实验结果：1.不同浓度、不同作用时间PAB处理人子宫内膜癌Ishikawa细胞后对细胞增殖有显著影响,PAB对Ishikawa细胞的IC50值为19.332μM; PAB能够体外诱导Ishikawa细胞发生细胞周期G2/M期阻滞从而促进细胞凋亡。2.不同浓度的PAB作用于Ishikawa细胞后,划痕实验结果显示PAB能够明显抑制细胞迁移；Transwell培养侵袭实验结果显示,PAB显著降低Ishikawa细胞穿膜的个数；平板克隆结果显示PAB作用于Ishikawa细胞后,显著降低克隆形成率。3.不同浓度的PAB作用于Ishikawa细胞后,蛋白水平上p-ERKl/2与总ERK1/2的比值降低,VEGF、MMP9蛋白表达下调,E-cad蛋白表达上调。结论：1.土槿乙酸可以诱导人子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡。2.土槿乙酸可以抑制人子宫内膜癌Ishikawa细胞转移。3.土槿乙酸通过影响细胞增殖信号通路的关键分子MAPK及转移相关基因蛋白MMP9、E-cad、VEGF的表达发挥作用。
【关键词】：子宫内膜癌 Ishikawa细胞 土槿乙酸 凋亡 转移 机制
【学位授予单位】：辽宁大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-14
• 引言14-19
• 0.1 子宫内膜癌14-17
• 0.1.1 子宫内膜癌流行现状14-15
• 0.1.2 子宫内膜癌病理现状15
• 0.1.3 子宫内膜癌治疗进展15-17
• 0.2 土槿乙酸简介17-18
• 0.3 本课题的设计思想及研究内容18-19
• 第1章 土槿乙酸诱导人子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡的研究19-34
• 1.1 材料与仪器19-21
• 1.1.1 实验材料19
• 1.1.2 实验试剂19-20
• 1.1.3 实验仪器20-21
• 1.2 实验方法21-25
• 1.2.1 细胞培养21-22
• 1.2.2 MTT比色法检测不同浓度及不同作用时间土槿乙酸对人子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖的影响22-23
• 1.2.3 FCM检测不同浓度及不同作用时间土槿乙酸对人子宫内膜癌Ishikawa细胞周期的影响23-24
• 1.2.4 FCM检测不同浓度及不同作用时间土槿乙酸对人子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡的影响24-25
• 1.3 实验结果25-31
• 1.3.1 土槿乙酸对人子宫内膜癌Ishikawa细胞形态的影响25
• 1.3.2 MTT法检测土槿乙酸对人子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖的影响25-27
• 1.3.3 FCM检测不同浓度及不同作用时间土槿乙酸对人子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡的影响27-29
• 1.3.4 FCM检测不同浓度及不同作用时间土槿乙酸对人子宫内膜癌Ishikawa细胞周期的影响29-31
• 1.4 讨论31-32
• 1.5 小结32-34
• 第2章 土槿乙酸抑制人子宫内膜癌Ishikawa细胞转移的研究34-48
• 2.1 材料与仪器34-35
• 2.1.1 实验材料34
• 2.1.2 实验试剂34-35
• 2.1.3 实验仪器35
• 2.2 实验方法35-38
• 2.2.1 细胞培养35
• 2.2.2 粘附实验检测不同浓度土槿乙酸作用后对人子宫内膜癌Ishikawa细胞粘附能力的影响35-36
• 2.2.3 划痕实验检测不同浓度土槿乙酸作用后对人子宫内膜癌Ishikawa细胞迁移能力的影响36-37
• 2.2.4 Transwell方法检测不同作用浓度土槿乙酸作用后对人子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭能力的影响37
• 2.2.5 平板克隆方法检测不同作用浓度土槿乙酸作用后对人子宫内膜癌Ishikawa细胞克隆形成能力的影响37-38
• 2.3 实验结果38-46
• 2.3.1 粘附实验检测土槿乙酸对人子宫内膜癌Ishikawa细胞粘附能力的影响38-39
• 2.3.2 划痕实验检测不同浓度土槿乙酸作用后对人子宫内膜癌Ishikawa细胞迁移能力的影响39-42
• 2.3.3 Transwell方法检测不同作用浓度土槿乙酸作用后对人子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭能力的影响42-44
• 2.3.4 平板克隆方法检测不同作用浓度土槿乙酸作用后对人子宫内膜癌Ishikawa细胞克隆形成能力的影响44-46
• 2.4 讨论46-47
• 2.5 小结47-48
• 第3章 土槿乙酸诱导人子宫内膜细胞Ishikawa凋亡及抑制其转移的分子机制48-60
• 3.1 材料与方法48-50
• 3.1.1 实验材料48-49
• 3.1.2 实验试剂49
• 3.1.3 实验仪器49-50
• 3.2 实验方法50-53
• 3.2.1 细胞培养50
• 3.2.2 Western blot检测土槿乙酸作用后人子宫内膜癌Ishikawa细胞中蛋白表达的变化50-53
• 3.3 实验结果53-56
• 3.3.1 Western blot法检测土槿乙酸作用后人子宫内膜癌Ishikawa细胞中相关蛋白表达的变化53-56
• 3.4 讨论56-58
• 3.4.1 PAB诱导人子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡信号通路的研究信号56-57
• 3.4.2 PAB抑制人子宫内膜癌Ishikawa细胞转移信号通路的研究信号57-58
• 3.5 小结58-60
• 第4章 结论与展望60-62
• 4.1 结论60-61
• 4.2 进一步工作的方向61-62
• 致谢62-63
• 参考文献63-69
• 攻读学位期间发表的学术论文及参加科研情况69

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本文编号：651408