AKT2通过PKM2调控卵巢癌细胞增殖作用的研究

发布时间：2017-08-23 03:10

  本文关键词：AKT2通过PKM2调控卵巢癌细胞增殖作用的研究

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【摘要】：卵巢癌是最致命的妇科恶性肿瘤在美国,在2013年约有22240新病例被确诊,其中有14030名女性死于该疾病。卵巢癌是经常被称为“沉默的杀手”,因为大多数情况下,被确诊时已是临床晚期,已经成为威胁妇女生命和健康的主要恶性肿瘤。在查阅大量相关文献的基础上,本课题主要应用免疫组化技术,基因克隆、慢病毒包装和转导,免疫印迹、si RNA敲减、MTT等技术,探讨蛋白激酶B(AKT2)通过PKM2调控卵巢癌细胞增殖的作用,为发现有效的药物治疗作用的靶点奠定重要基础。本课题第一部分首先应用免疫组化技术初步验证人类卵巢癌组织中AKT2与PKM2表达异常是否存在相关性,收集卵巢癌组织病例116例和卵巢良性肿瘤周边正常组织50例,测定癌组织及卵巢良性肿瘤周边的正常组织中AKT2和PKM2的表达,统计学方法分析及判断AKT2在癌及正常组织中的表达是否存在差异,并通过对比PKM2的表达,总结出AKT2和PKM2与卵巢癌发展及恶变的相应关系,在组织样本中验证AKT2在卵巢癌中的表达是否与PKM2的表达存在着关联。结果表明:AKT2在100(100/116)例卵巢癌组织中过表达,过表达率为86.2%,AKT2仅在4例(8%)卵巢良性肿瘤周边正常组织中表达,Fisher’s精确检验检验结果表明:AKT2在卵巢癌和卵巢良性肿瘤周边正常组织中表达差异具有统计学意义(P0.001),AKT2和PKM2在卵巢癌组织中的表达具有相关性(R=0.505)(P0.001)。以第一部分的结果为依据,本课题的第二、三部分重点探讨AKT2通过PKM2调控卵巢癌细胞的生物学行为。本课题第二部分应用本实验室原有的模板扩增AKT2基因c DNA,以Xho I和Xba I酶切位点克隆入慢病毒表达载体(p LVX-Neo-IRES-Zs Green)中,测序鉴定正确后同慢病毒包装辅助质粒混合物共转染293T细胞,慢病毒包装成功后再用AKT2重组的慢病毒液转导卵巢癌SKOV3细胞,Western-Bolt鉴定并筛选出AKT2过表达的细胞株,结果表明成功地获得了能高效表达AKT2的慢病毒载体并成功的获得了AKT2过表达的卵巢癌SKOV3细胞株,为后续试验奠定了基础。本课题第三部分主要探究AKT2过表达对卵巢癌细胞增殖作用的影响以及si RNA干扰法降低AKT2过表达细胞中PKM2的表达,观察AKT2过表达前后以及敲减PKM2前后卵巢癌细胞增殖能力的变化,探究敲减PKM2后AKT2是否还能影响卵巢癌细胞增殖。结果表明:AKT2过表达的SKOV3细胞较感染空载体组及未感染组细胞增殖增强,差异具有统计学意义(P0.001),而感染空载体组和未感染组差异无统计学意义(P0.05);用PKM2-si RNA敲减AKT2过表达SKOV3细胞中的PKM2较阴性对照Scramble-si RNA转染的AKT2过表达的SKOV3细胞和未转染si RNA的AKT2过表达的SKOV3细胞的增殖活性差异具有统计学意义(P0.001),而用阴性对照Scramble-si RNA转染的细胞和未转染si RNA的AKT2过表达的SKOV3细胞的增殖活性差异无统计学意义(P0.05),结果初步提示AKT2过表达能使SKOV3卵巢癌细胞增殖能力增强,AKT2过表达细胞中敲减PKM2后细胞增殖能力下降。
【关键词】：卵巢癌细胞 蛋白激酶B 慢病毒表达载体 慢病毒包装 免疫组化Western-Bolt MTT
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 英文缩略词表4-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-14
• 第一部分 免疫组化检测卵巢癌及卵巢良性肿瘤周边正常组织中 AKT2和PKM2的表达14-22
• 引言14-15
• 材料和方法15-17
• 结果17-20
• 讨论20-21
• 小结21-22
• 第二部分 AKT2慢病毒载体的构建及慢病毒包装和转导目的细胞22-47
• 材料和方法23-34
• 结果34-45
• 讨论45-46
• 小结46-47
• 第三部分 AKT2通过PKM2调控卵巢癌细胞生物学行为的初步研究47-55
• 引言47
• 材料和方法47-50
• 结果50-53
• 讨论53-54
• 小结54-55
• 总结论55-57
• 参考文献57-60
• 致谢60-61
• 综述61-69
• 参考文献66-69

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 解智慧;孙秀华;柯丹;张洪开;于爱鸣;;肺癌中PI3K/AKT信号通路对Skp2调控机制的研究[J];山东医药;2010年08期

2 刘海艳;顾玉超;宓文义;于文功;;Akt1基因沉默降低小鼠乳腺癌细胞的肺转移能力[J];中国生物工程杂志;2009年03期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 韩俊永;AKT3在乳腺癌组织中的表达及对乳腺癌细胞生物学行为影响的研究[D];福建医科大学;2012年

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本文编号：722625