妊娠期DEHP暴露对小鼠胎盘生长与发育的影响

发布时间：2017-08-23 15:12

  本文关键词：妊娠期DEHP暴露对小鼠胎盘生长与发育的影响

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【摘要】：目的:邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(Di-(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP)作为一种增塑剂被广泛使用且存在于环境中,由于DEHP与塑料制品之间不能共价结合,且随着产品的反复使用、加热及清洗,其可通过呼吸道、消化道及皮肤等途径进入机体,对动物和人类生殖系统造成危害。已有研究显示,妊娠期DEHP暴露,可导致子宫内膜接受性明显下降、妊娠率降低、流产率升高以及胎儿体重减轻等现象。然而,这些是否与妊娠期间DEHP暴露导致胎盘的生长发育障碍密切相关呢?至目前为止,还未见相关的研究。本项目拟通过强制性灌胃方法,在体观察围植入期DEHP暴露对妊娠小鼠胎盘生长和发育的影响。方法:从妊娠第1天起,通过体外强制性灌胃方法给予不同剂量的DEHP(125、250、500 mg/kg/day),于妊娠第9天(GD9)和13天(GD13)取子宫、胚胎及胎盘标本。通过HE染色观察DEHP暴露对胎盘组织结构的影响;通过免疫组织化学方法观察DEHP暴露对胎盘增殖和迷路层血管发育的影响;通过实时定量PCR分析DEHP暴露对胎盘标志性基因表达水平的影响;Western blot方法分析DEHP暴露对胎盘凋亡及相关的信号通路的影响。结果:(1)在GD9,与对照组相比,不同剂量DEHP处理对胚胎的重量以及胚胎与体重的比值,均无明显影响(P0.05)。然而,在GD13,随着DEHP浓度的增加,胚胎加胎盘的重量以及其与体重的比值均显著性降低(P0.05或0.01);胎盘的重量及其与体重的比值均低于对照组(P0.01)。(2)在GD9,DEHP的暴露明显抑制了外胎盘锥的生长和发育。在GD13,与对照组相比,DEHP的暴露明显降低胎盘总面积及海绵层细胞的面积(P0.05或0.01)。(3)在GD9、GD13,与对照组相比,DEHP暴露均明显抑制胎盘中Ascl2、Esx1 mRNA的表达水平(P0.05或0.01)。在GD9,DEHP处理组Fosl1 mRNA的表达水平与对照组之间无显著性差异(P0.05)。然而,在GD13,与对照组相比,dehp暴露均明显抑制胎盘中fosl1mrna的表达水平(p0.01),增加eomes、hand1mrna的表达水平(p0.05或0.01)。(4)在gd13,与对照组相比,dehp暴露可明显抑制小鼠胎盘迷路层血管的形成。(5)免疫组织化学结果显示,在gd9、gd13,与对照组相比,外胎盘锥、胎盘迷路层及海绵层的ki67阳性细胞均明显下降(p0.05或0.01)。(6)在gd13,与对照组相比,dehp处理组胎盘bax、caspase-3和caspase-8mrna表达水平均显著性升高,bcl-2mrna表达水平显著降低(p0.05或0.01)。然而,在gd9,dehp处理组与对照组之间没有显著性的差异(p0.05)。免疫印迹结果显示,在gd9、gd13,与对照组相比,dehp处理组caspase-3和caspase-8均被激活。在gd13,dehp处理组bax蛋白表达水平明显升高,而bcl-2蛋白水平明显下降(p0.01)。(7)westernblot检测显示,在gd9,与对照组相比,250mg/kg/day和500mg/kg/day的dehp处理明显增加erk1/2磷酸化水平(p0.01)。在gd13,erk1/2磷酸化水平随着dehp浓度的增加而显著性增加(p0.05或0.01)。结论:(1)妊娠期间dehp暴露可显著性抑制小鼠外胎盘锥和胎盘的生长与发育。(2)妊娠期间dehp暴露可破坏小鼠胎盘迷路层血管的形成。(3)妊娠期间dehp暴露可明显抑制小鼠外胎盘锥和胎盘的增殖。(4)dehp可通过激活mapk信号通路以及凋亡相关其因caspase-3、-8、bax上调和bcl-2下调促进胎盘的凋亡。
【关键词】：
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R714.2
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 中英文缩写一览表10-11
• 第1章 引言11-15
• 1.1 引起生物机体病变12
• 1.2 对人体器官产生危害12
• 1.3 对动物及人类生殖系统的毒性作用12-15
• 1.3.1 对雄性生殖系统的毒性作用12-13
• 1.3.2 对雌性生殖系统的毒性作用13-15
• 第2章 材料与方法15-24
• 2.1 材料15-18
• 2.1.1 实验动物15
• 2.1.2 主要试剂15-16
• 2.1.3 主要仪器16-17
• 2.1.4 实验溶液配制17-18
• 2.2 实验方法18-24
• 2.2.1 实验动物及处理18-19
• 2.2.2 组织切片的制作19
• 2.2.3 HE染色19
• 2.2.4 RNA的提取和实时荧光定量PCR19-20
• 2.2.5 免疫组织化学20-21
• 2.2.6 蛋白印迹21-23
• 2.2.7 统计学分析23-24
• 第3章 结果24-34
• 3.1 妊娠期DEHP暴露对胚胎着床和胎盘重量的影响24-26
• 3.2 DEHP暴露对胎盘组织结构的影响26-29
• 3.3 DEHP暴露对胎盘发育相关基因表达的影响29
• 3.4 DEHP暴露破坏胎盘迷路层血管的形成29-30
• 3.5 DEHP暴露对胎盘增殖和凋亡的影响30-33
• 3.6 DEHP对MAPK信号通路的影响33-34
• 第4章 讨论34-37
• 第5章 结论37-38
• 致谢38-39
• 参考文献39-43
• 攻读学位期间的研究成果43-44
• 综述44-51
• 参考文献48-51

【参考文献】

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1 马明月;张玉敏;裴秀丛;段志文;;青春期前邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯暴露对雌性大鼠生殖发育及过氧化物酶体增殖剂激活受体的影响[J];卫生研究;2011年06期

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本文编号：725733