不同张力扩张子宫颈诱导大鼠延髓内脏带Fos及nNOS的表达变化

发布时间：2017-08-24 11:17

  本文关键词：不同张力扩张子宫颈诱导大鼠延髓内脏带Fos及nNOS的表达变化

  更多相关文章： 子宫颈扩张 延髓内脏带 C-fos 神经型一氧化氮合酶

【摘要】：背景：分娩痛是临床上典型的重度内脏痛之一,可使产妇产生循环负荷加重、呼吸性酸碱紊乱、宫缩不协调、产程延长等一系列负面影响,最后会危及产妇和胎儿的生命,子宫颈扩张是导致分娩痛尤其是第一产程分娩痛的主要原因,但其详尽机制尚不明了,临床上也无理想的分娩镇痛方法。有研究报道,延髓内脏带参与了内脏痛的形成和传导,然而,分娩痛的形成和传递是否与延髓内脏带有关联?至今未见有报道。本实验首先通过建立大鼠子宫颈扩张模型(Uterine cervical distension, UCD)然后研究不同子宫颈扩张张力下大鼠延髓内脏带神经元c-fos% nNOS的表达变化,探讨延髓内脏带内c-fos、nNOS在子宫颈扩张性疼痛中的作用机制。目的：1.给予不同扩张张力的大鼠急性子宫颈扩张模型,利用延髓内脏带内神经元c-fos表达的不同变化,分析该动物模型的可行性及可靠性。2.观察不同张力扩张子宫颈诱导大鼠延髓内脏带神经元c-fos、nNOS的表达变化,探讨子宫颈扩张性疼痛在延髓水平的传导机制。材料和方法：成年雌性SD大鼠36只,体重250 g-280 g,随机分为对照组(UCD 0 g组)、子宫颈扩张50克张力组(UCD 50 g组)和子宫颈扩张100克张力组(UCD 100g组),异氟醚吸入麻醉,利用生物信号采集处理系统,连续监测心率。经大鼠下腹正中切口暴露宫颈,以二金属钩分别穿过两侧宫颈,一侧金属钩尾端固定,另一侧通过滑轮连接不同质量砝码(50 g、100 g),对照组不予实施刺激,实验组实施UCD30分钟,恢复二小时后,取延髓组织采用NADPH-d组织化学和c-fos的免疫组化双重染色的方法,观察c-fos、nNOS和c-fos/nNOS阳性神经元的分布,Western Blot法检测c-fos, nNOS蛋白水平,RT-PCR法检测c-fos, nNOS mRNA的表达。比较对照组与UCD组c-fos、nNOS在延髓水平的表达变化。结果：1.c-fos免疫阳性神经元细胞核为棕黄色,呈圆形或卵圆形,胞浆不着色。nNOS阳性神经元的胞体和突起呈蓝色,胞核不着色,呈空泡状,c-fos/nNOS双标神经元的胞体和树突染成蓝色,细胞核呈棕黄色,这些神经元主要分布于延髓孤束核(thenucleus tractus solitarii, NTS)和外侧网状核(The lateral reticular nucleus, LRN)内。2.与UCDOg组相比,UCD 50 g组和UCD 100 g组大鼠延髓NTS和LRN内c-fos, nNOS以及c-fos/nNOS阳性神经元数量明显增加,染色明显加深,c-fos, nNOS蛋白及mRNA水平均明显升高(p0.01), UCD100g组高于UCD 50 g组(p0.05)。结论：1.该模型与其它内脏痛刺激诱导的延髓c-fos表达相一致,并且表现出c-fos张力依赖性表达增加,证实了该模型作为急性子宫颈扩张的可靠性。2.大鼠急性子宫颈扩张可导致延髓孤束核和外侧网状核神经元c-fos及nNOS张力依赖性表达增加,NTS和LRN内的nNOS阳性神经元可能参与子宫颈扩张性疼痛在延髓水平的传导。
【关键词】：子宫颈扩张 延髓内脏带 C-fos 神经型一氧化氮合酶
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R714
【目录】：

• 致谢4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 缩略词表11-14
• 1 绪论14-16
• 2 材料与方法16-30
• 2.1 实验动物16-21
• 2.2 分组与模型制作21-22
• 2.3 标本提取和处理22-23
• 2.4 NADPH-d组织化学和Fos免疫组化双重染色观察延髓c-fos/nNOS阳性神经元表达23-24
• 2.5 RT-qPCR检测延髓c-fos,nNOS mRNA的表达24-26
• 2.6 Western blotting检测延髓c-fos,nNOS蛋白水平变化26-28
• 2.7 统计分析28-30
• 3 结果30-39
• 3.1 延髓Fos阳性神经元、nNOS阳性神经元和Fos/nNOS双标神经元的形态和分布30-34
• 3.2 延髓组织c-fos,nNOS mRNA水平变化34-36
• 3.3 延髓组织c-fos,nNOS蛋白水平变化36-39
• 4 讨论39-41
• 5 结论41-42
• 参考文献42-46
• 综述46-55
• 参考文献51-55
• 作者简历及在学期间所取得的科研成果55

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本文编号：731008