BML-111下调OPN抑制Hela细胞（宫颈癌）增殖和迁移

发布时间：2017-08-24 21:41

  本文关键词：BML-111下调OPN抑制Hela细胞（宫颈癌）增殖和迁移

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【摘要】：目的:人乳头状瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)持续感染引起的宫颈慢性炎症是导致宫颈癌发生的最主要原因。脂氧素(lipoxins,LXs)是炎症反应的“刹车信号”[1,2]。故推测脂氧素类似物(BML-111)可能通过抑制宫颈慢性炎症来抑制宫颈癌的发生。本实验拟用脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)体外模拟炎症微环境,观察BML-111对LPS诱导的宫颈癌Hela细胞株的增殖和迁移的影响。并与沉默OPN基因的Hela细胞比较,再次观察BML-111对细胞增殖和迁移的影响,并对其发生机制进行研究,为宫颈癌的临床治疗提供实验依据。方法:(1)通过MTT实验,应用LPS诱导Hela细胞的炎症反应,并检测BML-111对细胞存活率的影响;(2)通过Western blot(免疫印迹法)观察BML-111对LPS诱导的Hela细胞OPN、P53、MMP2及MMP9蛋白表达的影响;(3)通过转染沉默OPN基因的质粒,在人Hela细胞产生OPN表达的抑制,通过Western blot方法再次观察BML-111对LPS诱导的Hela细胞OPN、P53、MMP2及MMP9蛋白表达的影响;(4)通过划痕实验和Transwell实验,用LPS诱导Hela细胞的出现炎症反应后,观察BML-111对Hela细胞迁移的影响。结果:(1)MTT显示,用不同浓度的LPS刺激Hela细胞检测24h细胞存活率,空白组、100,10,1,0.1μg/mL LPS刺激组OD值分别为0.8319±0.01894,1.1611±0.01548,1.1587±0.01805,1.1486±0.01209,1.1502±0.01653,LPS的四个浓度组均能促进Hela细胞增殖(P0.05),且四组间无显著差异(P0.05)。(2)MTT结果显示,200μg/L BML-111对LPS诱导的Hela细胞增殖结果如下,空白组、LPS组、LPS+BML-111组和LPS+BML-111+Boc-2组的OD值分别为0.8314±0.01462、1.1744±0.01667、0.8338±0.01867、1.0344±0.02506。BML-111能明显抑制LPS诱导的Hela细胞增殖(P0.05),给予Boc-2预处理后BML-111的抑制增殖作用消失(P0.05)。(3)通过Western blot方法检测,在未转染组中,LPS刺激组OPN、P53、MMP2及MMP9表达均明显增强(P=0.0000.05),BML-111明显抑制LPS诱导的OPN、P53、MMP2及MMP9表达增强(P=0.0000.05)。而加入Boc-2预处理后,BML-111的抑制作用消失(OPN P=0.000,P53 P=0.000均0.05)。(4)通过Western blot方法检测,将Hela细胞转染沉默OPN基因的质粒,在转染48小时后,空白组、LPS组、LPS+BML-111组和LPS+BML-111+Boc-2各组间的OPN、P53(突变型)、MMP2及MMP9蛋白的表达无明显差异。(5)通过细胞划痕和Transwell实验,在未转染组中,相对于空白组而言,LPS刺激组Hela细胞的迁移能力明显增强(P0.05);相对于LPS刺激组,LPS+BML-111组Hela细胞迁移能力明显减弱(P0.05);相对于LPS+BML-111组而言,LPS+BML-111+Boc-2组Hela细胞迁移能力明显增强(P0.05)。在转染组中,各组间蛋白表达无明显差异。结论:1.BML-111能明显抑制LPS诱导的Hela细胞增殖及迁移。2.BML-111抑制LPS诱导的Hela细胞增殖及迁移的作用是通过抑制OPN实现。
【关键词】：宫颈癌 增殖 迁移 脂氧素类似物 脂多糖 骨桥蛋白 P53 Boc-2
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 中英文缩写一览表10-11
• 第1章 引言11-14
• 第2章 材料和方法14-23
• 2.1 材料14-16
• 2.1.1 主要试剂14-15
• 2.1.2 主要仪器15
• 2.1.3 溶液配制15-16
• 2.2 方法16-23
• 2.2.1 细胞培养16-18
• 2.2.2 MTT实验18
• 2.2.3 细胞转染18-19
• 2.2.4 western-blot(蛋白免疫印迹法)19-21
• 2.2.5 细胞划痕实验（伤口愈合实验，wound healing test）21-22
• 2.2.6 细胞迁移实验22
• 2.2.7 统计学处理22-23
• 第3章 结果23-34
• 3.1 不同浓度LPS对Hela细胞增殖的影响23-24
• 3.2 BML-111对LPS诱导的Hela细胞增殖的影响24-25
• 3.3 BML-111 对 LPS 诱导的 Hela 细胞 OPN、P53（突变型）、MMP2以及 MMP 9 蛋白表达的影响25-26
• 3.4 沉默 OPN 基因的 Sh RNA 转染 Hela 细胞后，观察 BML-111 对LPS 诱导的 Si-OPN-Hela 细胞 OPN、P53、MMP2 及 MMP9 蛋白表达的影响26-29
• 3.5 BML-111抑制LPS引起的Hela细胞迁移及穿膜能力增加29-32
• 3.6 BML-111对LPS引起的Si-OPN-Hela细胞迁移及穿膜能力无影响32-34
• 第4章 讨论34-37
• 第5章 结论37-38
• 致谢38-39
• 参考文献39-42
• 攻读学位期间的研究成果42-43
• 综述43-49
• 参考文献48-49

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前9条

1 刘田雨;姚书忠;;宫颈癌肿瘤微环境研究进展[J];国际妇产科学杂志;2015年02期

2 郝华;徐芬;邬黎青;张昕昕;戴华;;脂氧素类似物BML-111抑制Hela细胞增殖及机制初探[J];实用医学杂志;2014年13期

3 曾艳;周蓉;;骨桥蛋白在子宫颈癌组织中表达及其与宫颈癌侵袭转移关系的研究[J];中外医疗;2014年11期

4 方芳;惠宁;;下调骨桥蛋白对宫颈癌Hela细胞生长和侵袭的影响[J];现代妇产科进展;2013年01期

5 Hui-Juan Yang;;Aberrant DNA methylation in cervical carcinogenesis[J];Chinese Journal of Cancer;2013年01期

6 黄波;;肿瘤微环境中免疫与炎症的调节[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2012年02期

7 靳亚妮;王海琳;侯大乔;;STAT3信号转导通路调控人宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡的机制[J];中国妇幼保健;2011年29期

8 吉登波;崔景荣;;肿瘤的发生、发展及治疗与炎症的关系[J];中国新药杂志;2010年17期

9 王培桦,沈洪兵,陈峰,赵金扣;叉生分析在基因-环境交互作用研究中的应用与意义[J];中华流行病学杂志;2005年01期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 熊晶;宫颈癌Hela细胞中HIF-2α基因的表达及相关研究[D];中南大学;2010年

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 吴婷婷;NF-κB及相关因子在宫颈癌细胞株中的表达及意义[D];山西医科大学;2013年

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本文编号：733282