雄激素受体剪接变异体核转功能障碍的机制研究

发布时间：2017-08-31 01:06

  本文关键词：雄激素受体剪接变异体核转功能障碍的机制研究

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【摘要】：1、HSP90在AR基因pre-mRNA剪接变异体核转位障碍中的作用 研究目的：明确HSP90在雄激素受体剪接变异体核转位障碍中的作用,阐述其与PCOS患者高雄状态之间的关系。 研究方法：建立过表达细胞模型,使用免疫荧光技术,分析由不同AR剪接变体编码的蛋白质核转位能力的差异。并通过Co-IP和Western Blot技术分析AR剪接变异体与HSP90的结合亲和力的改变。同时利用免疫荧光技术检测AR剪接变异体与HSP90的亚细胞共定位变化。 研究结果：免疫荧光实验发现过表达模型在雄激素暴露2小时后野生型AR绝大部分入核,而两种剪接变异体(缺失型AR和插入型AR)大部分仍集中在胞浆中,入核明显减少,出现核转位障碍；免疫共沉淀实验发现未受到雄激素刺激时两种雄激素受体剪接变异体与野生型雄激素受体相比结合了更多的HSP90,在雄激素刺激后,两种剪接变异体与HSP90的结合出现了明显的下降。共定位实验显示雄激素暴露后两种剪接变异体与HSP90的共定位主要出现在胞浆中,并且共定位明显减少。 结论：雄激素受体剪接变异体与HSP90的结合出现异常,可能是其核转位障碍的重要原因。 2、Importin a在AR基因pre-mRNA剪接变异体核转位障碍中的作用 研究目的：明确importin a在雄激素受体剪接变异体核转位障碍中的作用,阐述其与PCOS患者高雄状态之间的关系。 研究方法：建立过表达细胞模型,使用免疫荧光技术,分析由不同AR剪接变体编码的蛋白质核转位能力的差异。并通过Co-IP技术分析造成这种核转位差异的可能机制。将沉淀下来的蛋白质复合物进行Western Blot以检测与核转位过程关系密切的蛋白质importin a以分析雄激素受体的野生型和剪接变体与其结合解离能力的差异,从而阐明AR剪接变体与高雄的关系。 研究结果：免疫荧光实验发现过表达模型在雄激素暴露2小时后野生型AR绝大部分入核,而两种剪接变异体(缺失型雄激素受体和插入型雄激素受体)大部分仍集中在胞浆中,入核明显减少,出现核转位障碍；免疫共沉淀实验发现未受到雄激素刺激时两种雄激素受体剪接变异体与野生型雄激素受体相比结合了更多的importin a,在雄激素刺激后,两种剪接变异体与importin a的结合出现了明显的下降。共定位实验显示雄激素暴露后两种剪接变异体与importin a的共定位主要出现在胞浆中,并且共定位明显减少。 结论：雄激素受体剪接变异体与importin a的结合出现异常,可能是其核转位障碍的重要原因。
【关键词】：雄激素受体 剪接变异 高雄 多囊卵巢综合征 分子伴侣 核转位 雄激素受体 剪接变异 高雄 多囊卵巢 核输入蛋白 核转位
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R711.75
【目录】：

• 致谢5-8
• 中文摘要8-11
• Abstract11-15
• 缩略词表15-18
• 第1章 HSP90在AR基因pre-mRNA剪接变异体核转位障碍中的作用18-47
• 1.0 背景18-22
• 1.1 材料与方法22-33
• 1.1.1 主要试剂与仪器22-24
• 1.1.2 研究对象24-25
• 1.1.3 研究方法25-33
• 1.2 结果33-43
• 1.2.1 三种AR过表达效率33-34
• 1.2.2 HSP90在三种过表达模型中的mRNA表达水平34
• 1.2.3 三种AR在KGN细胞中的核转位能力34-36
• 1.2.4 三种AR与HSP90及HSP70的结合能力36-38
• 1.2.5 三种AR与HSP90的亚细胞共定位38-40
• 1.2.6 检测过表达三种AR的293细胞胞浆中三种AR、HSP90及HSP70的蛋白表达水平40-43
• 1.3 讨论43-46
• 1.4 结论46-47
• 第2章 Importin α在AR基因pre-mRNA剪接变体核转位障碍中的作用47-63
• 2.1 背景47-49
• 2.2 材料与方法49-53
• 2.2.1 主要试剂与仪器49-51
• 2.2.2 研究对象51
• 2.2.3 研究方法51-53
• 2.3 结果53-60
• 2.3.1 Importin α在三种AR过表达模型中核转位情况53
• 2.3.2 过表达三种AR的293细胞中importin α表达水平53-54
• 2.3.3 三种AR与importin α的结合能力54-55
• 2.3.4 三种AR与Importin α的亚细胞共定位55-57
• 2.3.5 检测过表达三种AR的293细胞胞浆中三种AR、importinα的蛋白表达水平57-60
• 2.4 讨论60-62
• 2.5 结论62-63
• 参考文献63-71
• 综述71-78
• 参考文献76-78
• 研究生期间发表学术论文78-79
• 个人简历79-80

【共引文献】

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本文编号：762536