大黄素抑制上皮性卵巢癌细胞发生上皮间质转化的作用及其机制研究

发布时间：2017-09-09 18:20

  本文关键词：大黄素抑制上皮性卵巢癌细胞发生上皮间质转化的作用及其机制研究

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【摘要】：研究背景：卵巢癌是妇科恶性肿瘤中死亡率最高的疾病。其中90%被归类为上皮性卵巢癌(EOC)。大多数的EOC患者在初诊时就为晚期,5年总生存率约为40%。侵袭和转移过程仍然是导致EOC患者复发和死亡的主要原因,但是其分子机制并不完全清楚。大量研究表明,上皮间质转化(EMT)在调节肿瘤转移的过程中发挥了至关重要的作用。越来越多的证据表明,EMT在上皮性卵巢癌细胞获得侵袭及转移能力方面有着非常关键的作用。由此可见,抑制EMT的靶向治疗将使EOC患者获益。大黄素,化学名为1,3,8-三羟基-6-甲基葸醌,它是一种从虎杖、大黄等的根茎中提取出来的一种蒽醌类衍生物。大黄素对多种癌症具有抗肿瘤效应,其中包括EOC。一项研究阐明,大黄素对A2780(紫杉醇敏感株)和A2780/taxol(紫杉醇耐药株)均具有抑制细胞增殖和诱导凋亡的效应,这种作用是通过减少抗凋亡分子的表达,例如survivin、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)。此外,大黄素可以通过抑制基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达从而抑制HO-8910PM细胞侵袭和转移。一项体外实验研究同样说明,大黄素对SKOV3和H08910细胞的侵袭具有抑制效应。但是,大黄素抑制侵袭和转移的分子机制并不清楚。其它癌症的相关研究表明,大黄素具有抑制结直肠癌、宫颈癌和头颈鳞癌细胞侵袭和转移的效应,这种作用与抑制EMT和WNT/β-catenin信号通路的失调节有关。因此,我们假设大黄素可能通过调节WNT/β-catenin信号通路来抑制上皮性卵巢癌细胞发生EMT,从而减弱其侵袭和转移能力。目的：探讨大黄素对上皮性卵巢癌细胞侵袭、转移和上皮间质转化的作用及其机制。方法：1.倒置显微镜观察A2780、OVCAR-3和SK-OV-3细胞的形态。2.CCK-8法检测大黄素对A2780和SK-OV-3细胞增殖能力的影响。3. Transwell小室检测A2780、OVCAR-3和SK-OV-3细胞的相对侵袭能力和大黄素对A2780和SK-OV-3细胞侵袭能力的影响。4. Western blot检测大黄素(0,10,20,40 μM)作用后以及糖原合成激酶-3β(GSK-3β)酶抑制剂10 μM　SB216763预处理后,A2780和SK-OV-3细胞中上皮表型E-cadherin、keratin,间质表型vimentin、N-cadherin、MMP-2、MMP-9以及相关通路指标GSK-3β, p-GSK-3βSer9, β-catenin和转录因子ZEB1的表达变化。5. ZEB1 siRNA作用于A2780和SK-OV-3细胞后,检测大黄素对细胞的侵袭能力和上皮间质转化的影响。结果：1.A2780、OVCAR-3和SK-OV-3细胞的形态和相对侵袭能力的检测：低侵袭能力的OVCAR-3细胞和高侵袭能力的A2780、SK-OV-3细胞分别显示出上皮性与间质性的形态及分子表达。2.大黄素对A2780和SK-OV-3细胞增殖、侵袭和上皮间质转化的影响：大黄素(20 μM)对A2780和SK-OV-3细胞增殖无明显的抑制作用(P0.05)。大黄素(20 μM)作用后细胞的侵袭能力明显减弱(P0.01)。大黄素(0,10,20,40 μM)作用48小时后,上皮表型E-cadherin和keratin表达明显增加,间质表型vimenti、N-cadherin、MMP-2和MMP-9表达明显减少,且表型表达变化呈药物浓度依赖性。3.大黄素抑制A2780和SK-OV-3细胞发生上皮间质转化的机制研究：大黄素(0,10,20,40 μM)作用48小时后,上皮间质转化相关通路指标p-GSK-3βSer9,β-catenin表达明显减少,呈药物浓度依赖性,GSK-3p表达无明显改变；转录因子ZEB1表达明显减少,呈药物浓度依赖性。应用10 μMGSK-3β酶抑制剂SB216763预处理6小时后,大黄素(20 μM)继续处理48小时,大黄素的以上作用明显减弱。4.大黄素抑制A2780和SK-OV-3细胞发生上皮间质转化的机制的验证：大黄素单独作用组与应用ZEB1 siRNA预先转染的细胞加入大黄素作用组相比,GSK-3p酶活性和β-catenin没有明显变化。应用ZEB1 siRNA预先转染的细胞再加入大黄素作用组与单独应用ZEB1 siRNA转染组或大黄素单独作用组相比,A2780和SK-OV-3细胞的侵袭能力更低,vimentin表达更低,·keratin表达更高,相应地,ZEB1的表达水平也是最低的(P0.01)。结论：1.大黄素能够明显抑制上皮性卵巢癌细胞的侵袭、转移能力和上皮间质转化过程。2.大黄素抑制上皮性卵巢癌细胞发生上皮间质转化是通过调节GSK-3β/β-catenin/ZEB1信号通路的机制完成的。
【关键词】：大黄素 卵巢癌 上皮间质转化 Wnt/β-catenin信号通路 ZEB1
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 符号说明13-15
• 前言15-18
• 材料与方法18-33
• 结果33-35
• 讨论35-38
• 结论38-39
• 附图39-47
• 参考文献47-52
• 致谢52-53
• 攻读学位论文期间发表的学术论文目录53-54
• 附表54

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本文编号：822019