PADI4基因对不同p53状态的卵巢癌细胞系生长及转移的影响

发布时间：2017-09-14 02:18

  本文关键词：PADI4基因对不同p53状态的卵巢癌细胞系生长及转移的影响

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【摘要】：目的探讨在卵巢癌细胞系A2780和SKOV3中PADI4的表达以及对卵巢癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响,并筛选出与PADI4作用机制有关的基因。方法本研究选用p53基因表达阳性的卵巢癌细胞A2780和p53基因表达阴性的卵巢癌细胞SKOV3,分别在体外试验中转染PADI4-siRNA,并设置阴性对照组(NC组)及空白对照组(BC组),采用实时定量PCR和Western blot检测两种卵巢癌细胞中PADI4 mRNA水平和蛋白水平的表达,从而确定PADI4-siRNA的沉默效率。采用CCK-8试剂盒、Annexin V-PE/7-AAD双染和transwell小室的方法分别检测转染PADI4-siRNA后卵巢癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭的情况。PCRArray筛选p53信号通路、凋亡和转移相关基因中与PADI4作用机制相关的基因,并用实时定量PCR验证PCR Array的实验结果。结果1.实时定量PCR和Western blot检测到转染PADI4 siRNA可有效抑制两种卵巢癌细胞中PADI4mRNA水平和蛋白水平的表达。2.与NC组相比,PADI4-siRNA组中的卵巢癌细胞A2780和SKOV3的增殖均明显被抑制(PA27800.05; PsKOV30.001);在PADI4-siRNA组中A2780细胞的凋亡细胞比例明显增加(P0.001),迁移和侵袭能力明显减弱(P0.001),而SKOV3细胞的凋亡、迁移和侵袭情况与阴性对照siRNA组相比无统计学意义。3.在卵巢癌细胞A2780中,抑制PADI4的表达后,通过基因芯片验证与p53信号通路、凋亡和转移相关的227个基因中有13个基因表达量较NC组上调或者下调,在p53信号通路中有2个基因显著上调,分别是雌激素受体1(ESR1)和肿瘤坏死因子(TNF),另外还有4个显著下调的基因,分别是Sestrin 2 (SESN2)、肿瘤蛋白p63(TP63)、糖基化磷酯酰肌醇锚定蛋白(GML)和白介素6(IL6)。在与凋亡相关的基因中有2个显著上调的基因,分别是肿瘤坏死因子受体超级家族9(TNFRSF9)和细胞凋亡诱导DFFA影响因子a (CIDEA),另有4个显著下调的基因,分别是BCL2-like2 (BCL2L2),BCL2-拮抗因子1(BAK1)、肿瘤坏死因子受体超家族11b (TNFRSF11B)和TNF超家族6(FASLG)O在与转移相关的基因中有3个显著上调的基因,分别为基质金属蛋白酶14 (MMP14)、WAS/WASL相互作用蛋白家族1(WIPF1)和胰岛素样生长因子1(IGF1),另有1个显著下调的基因,为整连蛋白(33 (ITGB3)结论靶向PADI4的siRNA在体外能有效沉默卵巢癌细胞A2780和SKO3中PADI4基因的表达；PADI4的沉默可抑制两种卵巢癌细胞A2780(野生型p53)和SKOV3 (p53缺失型)增殖,但抑制PADI4表达仅能在有p53基因表达时诱导卵巢癌细胞凋亡,在p53基因缺失时则不能诱导其凋亡。同时PADI4仅能在有p53基因表达时抑制卵巢癌细胞迁移和侵袭,而在p53基因缺失时不能抑制卵巢癌细胞迁移和侵袭能力。提示PADI4参与卵巢癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的调节机制,且可能与p53等相关基因有关,但p53信号通路并不是PADI4调节细胞增殖的唯一通路,提示PADI4在卵巢癌的发生发展中起到重要作用,这对以PADI4基因为靶点的抗肿瘤治疗具有重要的意义。
【关键词】：卵巢癌 肽基精氨酸脱亚胺酶4 p53信号通路 迁移 侵袭
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 符号说明11-12
• 前言12-13
• 材料和方法13-23
• 结果23-31
• 讨论31-36
• 结论36-37
• 综述37-41
• 参考文献41-45
• 致谢45-46
• 攻读学位期间发表的论文46-47
• 学位论文评阀及答辩情况表47

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 ;PADI4在肝癌细胞中表达的检测(英文)[J];Chinese-German Journal of Clinical Oncology;2009年08期

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本文编号：847279