MicroRNA-21参与上皮性卵巢癌的化疗耐药及其作用机制

发布时间：2017-09-21 17:36

  本文关键词：MicroRNA-21参与上皮性卵巢癌的化疗耐药及其作用机制

  更多相关文章： 上皮性卵巢癌 mi R-21 化疗耐药 Taqman探针 实时荧光定量PCR mi R-21 上皮性卵巢癌 顺铂 化疗耐药 PTEN

【摘要】：第一部分上皮性卵巢癌患者血清micro RNA-21的水平及其临床意义研究目的:检测上皮性卵巢癌化疗耐药及化疗敏感患者血清中micro RNA-21的表达,并探讨其评估上皮性卵巢癌化疗耐药及预后的可行性。方法:采用探针型real-time PCR技术检测和比较20例上皮性卵巢癌患者和10例正常人血清标本中micro RNA-21的表达,并分析血清micro RNA-21水平与上皮性卵巢癌患者化疗耐药及其临床病理特征的相关性。结果:正常人、上皮性卵巢癌化疗敏感和化疗耐药患者血清中micro RNA-21的相对表达量分别为0.573±0.318、2.606±1.057、26.766±26.710,上皮性卵巢癌化疗敏感和化疗耐药患者血清中mi R-21的相对表达量均显著高于正常人血清中mi R-21的相对表达量(P0.05),而上皮性卵巢癌化疗耐药患者血清中mi R-21表达显著高于上皮性卵巢癌化疗敏感患者,差异有统计学意义(P0.05)。化疗耐药患者血清mi R-21表达水平与其手术-病理分期无明显差异(P0.05),化疗耐药患者血清mi R-21的表达水平与是否发生淋巴结转移无明显相关性(P0.05)。结论:上皮性卵巢癌化疗耐药患者血清micro RNA-21水平显著升高,提示其可能是上皮性卵巢癌化疗耐药的潜在肿瘤标志之一。第二部分Micro RNA-21通过负性调节PTEN参与上皮性卵巢癌的顺铂耐药目的:通过检测卵巢癌细胞株SKOV3/DDP与SKOV3中mi R-21的差异性表达,探讨mi R-21在与上皮性卵巢癌的顺铂耐药关系。并进一步检测PTEN在m RNA水平和蛋白水平的表达,探讨mi RNA-21促进上皮性卵巢癌顺铂耐药的可能作用机制。方法:(1)MTT法检测SKOV3/DDP相对于其敏感细胞株对顺铂的耐药性和耐药指数;(2)采用real-time PCR技术检测mi RNA-21和PTEN m RNA在SKOV3及SKOV3/DDP中的差异性表达;(3)western blot检测PTEN蛋白在SKOV3及SKOV3/DDP细胞中的表达;(4)SKOV3细胞株和SKOV3/DDP细胞株分别用脂质体2000转染mi R-21 mimics及inhibitors。并分别设置阴性对照组。转染后,MTT法检测SKOV3及SKOV3/DDP细胞的耐药性。real time PCR测定SKOV3及SKOV3/DDP中mi R-21和PTEN m RNA的表达量。western blot的方法检测PTEN蛋白在卵巢癌敏感及耐药细胞株中的表达。结果:(1)顺铂对SKOV3及SKOV3/DDP细胞的IC50值分别为5.351μmol/L和22.488μmol/L,两者之间差异有统计学意义(P0.05),耐药指数为4.2倍。(2)从SKOV3及SKOV3/DDP中提取总RNA,real-time PCR的检测证实mi R-21在SKOV3/DDP中的相对表达量显著高于其在SKOV3细胞中的表达。而PTEN m RNA在SKOV3及SKOV3/DDP细胞中的表达无明显差异(P0.05)(3)western blot检测发现PTEN蛋白在SKOV3细胞中表达量高于其在SKOV3/DDP细胞的表达(4)real-time PCR检测证实SKOV3+mimics细胞中mi RNA-21的相对表达量较阴性对照组升高了344倍,而SKOV3/DDP+inhibitor细胞中mi RNA-21相对表达量约为阴性对照组的0.109倍,差异均有统计学意义(P0.05)。(5)real-time PCR检测证实SKOV3+mimics细胞中PTEN m RNA的相对表达量较阴性对照组明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。而SKOV3/DDP+inhibitor细胞中PTEN m RNA的相对表达量与阴性对照组PTEN m RNA的相对表达量无明显差异(P0.05)。PTEN m RNA在SKOV3+nc组和SKOV3/DDP+nc组的相对表达量亦无明显差异(P0.05)。(7)转染后,顺铂对SKOV3+nc和SKOV3+mimics细胞的IC50值分别为5.205μmol/L和25.763μmol/L,SKOV3+mimics细胞较阴性对照组耐药倍数升高约4.9倍。顺铂对SKOV3/DDP+nc和SKOV3/DDP+inhibitor细胞的IC50值分别为21.914μmol/L和15.524μmol/L,SKOV3/DDP+inhibitor细胞耐药倍数约为阴性对照组的0.7倍。(8)转染后,Western blot检测发现mi R-21在SKOV3细胞中的过表达下调PTEN蛋白的表达,而抑制mi R-21在SKOV3/DDP细胞中的表达上调PTEN蛋白的表达。结论:(1)SKOV3/DDP与SKOV3细胞株mi RNA-21的表达存在明显差异,提示mi RNA-21可能与卵巢癌细胞的顺铂耐药相关;(2)mi RNA-21可能通过负性调控PTEN的表达来调节上皮性卵巢癌细胞的顺铂耐药。
【关键词】：上皮性卵巢癌 mi R-21 化疗耐药 Taqman探针 实时荧光定量PCR mi R-21 上皮性卵巢癌 顺铂 化疗耐药 PTEN
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 中文摘要2-5
• ABSTRACT5-11
• 第一部分11-23
• 引言11-12
• 第一章 材料与方法12-17
• 第二章 结果17-20
• 2.1 卵巢癌化疗耐药组、化疗敏感组及正常人组血清MIR-21水平的比较17-18
• 2.2 上皮性卵巢癌化疗耐药组血清MIR-21水平与患者临床病理特征的相关性18-20
• 第三章 讨论20-21
• 参考文献21-23
• 第二部分23-43
• 引言23-25
• 第一章 材料与方法25-34
• 1.1 实验材料25-26
• 1.1.1 实验细胞株25
• 1.1.2 实验仪器设备及产地25
• 1.1.3 主要试剂及产地25-26
• 1.2 实验方法及步骤26-33
• 1.2.1 细胞培养26-27
• 1.2.2 MTT法测定SKOV3/DDP相对于SKOV3的耐药指数27-28
• 1.2.3 细胞总RNA的提取及质量检测28
• 1.2.4 反转录28-29
• 1.2.5 real-time PCR检测miR-21在SKOV3和SKOV3/DDP细胞中的表达29-30
• 1.2.6 real-time PCR结果计算(2-△Ct法)30
• 1.2.7 细胞转染30-31
• 1.2.8 细胞总蛋白的提取31
• 1.2.9 Western Blot31-33
• 1.3 统计学分析33-34
• 第二章 结果34-41
• 2.1 SKOV3及SKOV3/DDP细胞对顺铂的IC50值及耐药指数34
• 2.2 REAL TIME PCR检测MIR-21在SKOV3及SKOV3/DDP细胞中的表达水平34-35
• 2.3 REAL TIME PCR检测PTEN MRNA在SKOV3及SKOV3/DDP细胞中的表达水平35-36
• 2.4 WESTERN BLOT检测PTEN蛋白在SKOV3及SKOV3/DDP细胞中的表达36-37
• 2.5 荧光显微镜下观察卵巢癌细胞转染效率37
• 2.6 REAL-TIME PCR检测转染后SKOV3和SKOV3/DDP细胞中MIR-21表达的变化37-38
• 2.7 REAL-TIME PCR检测转染后SKOV3和SKOV3/DDP细胞中PTEN MRNA表达的变化38-39
• 2.8 MTT检测转染后卵巢癌细胞株对顺铂耐药性的变化39-40
• 2.9 WESTERN BLOT检测转染后SKOV3和SKOV3/DDP细胞中的PTEN蛋白的表达40-41
• 第三章 讨论41-43
• 结论43-44
• 参考文献44-46
• 综述46-55
• 参考文献51-55
• 攻读学位期间的研究成果55-56
• 致谢56-57

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