脑源性神经营养因子及其受体在多囊卵巢综合征大鼠中的表达研究

发布时间：2017-09-22 15:26

  本文关键词：脑源性神经营养因子及其受体在多囊卵巢综合征大鼠中的表达研究

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【摘要】：【目的】多囊卵巢综合征(Polycystic ovary syndrome,PCOS)是青春期及育龄女性中最常见的高度异质性的内分泌与代谢紊乱疾病,表现为月经稀发和不孕、雄激素过多症状、肥胖和胰岛素抵抗,可引起2型糖尿病、心血管疾病、子宫内膜癌等远期并发症。主要发病机制为由异常的内分泌及旁分泌因子、代谢障碍及卵泡内微环境的改变共同作用导致的卵泡发育障碍。近年来发现脑源性神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)作为正常卵泡发育的生理调节剂,在卵泡发育、卵母细胞成熟及早期胚胎发育等过程中起着重要作用。本研究通过构建PCOS大鼠模型,探讨BDNF及受体酪氨酸激酶受体B(tyrosine receptor kinase B,Trk B)在PCOS大鼠卵巢中的表达情况,从分子水平揭示BDNF-Trk B对PCOS患者卵泡发育障碍可能的病理生理机制。【方法】应用来曲唑诱导大鼠PCOS模型,模型组大鼠20只灌胃服用来曲唑1mg·kg-1·d-1(溶于1%羧甲基纤维素中),对照组灌胃服用1%羧甲基纤维素,两组均连续灌服21d。灌胃期间每日定时做大鼠阴道涂片加吉姆萨染色以监测两组大鼠的动情周期有无改变。造模后应用放射免疫法测定血清FSH、LH、E2、P、T水平,HE染色法观察卵巢组织学变化,Real-time PCR法检测模型组与对照组大鼠卵巢组织中BDNF及Trk B基因的表达,Western blot法检测两组大鼠卵巢组织中BDNF及Trk B蛋白的表达水平差异,免疫组织化学法检测Trk B在两组大鼠卵巢组织中的定位表达及其在不同级别卵泡中的表达差异。采用SAS 9.0统计软件包进行分析,结果采用x±s进行统计描述,组间比较均采用独立样本t检验。检验水准α=0.05,P0.05为差异有统计学意义。【结果】模型组大鼠在应用来曲唑后80%大鼠动情周期失去规律性变化。与对照组比较,模型组血清T、LH、FSH浓度显著增高,E2、P浓度显著降低,差异均有统计学意义(P0.05)。模型组卵巢体积增大,囊状扩张卵泡明显增多,黄体数量明显减少。模型组卵巢组织中BDNF m RNA表达量显著高于对照组(P0.05),而Trk B m RNA显著低于对照组(P0.05)。BDNF蛋白在PCOS模型组卵巢组织中的表达量显著高于对照组,Fl-Trk B在模型组的表达明显高于对照组,而tr-Trk B在模型组的表达明显低于对照组,均有统计学意义(P0.01)。Trk B在两组卵巢的颗粒细胞和卵母细胞上的表达量不同,其中Trk B在模型组大窦前卵泡的颗粒细胞中的表达强度明显高于对照组,在卵母细胞中的表达强度明显低于对照组,Trk B在模型组囊状卵泡的颗粒细胞中的表达强度远高于对照组窦状卵泡颗粒细胞的表达,均有统计学意义(P0.05)。Trk B在各级卵泡的颗粒细胞上的表达未见明显差异,而在卵母细胞上的表达呈递减趋势,即在原始卵泡卵母细胞上表达最强,然后随着卵泡发育Trk B在卵母细胞上的表达逐渐减弱。【结论】来曲唑诱导的PCOS大鼠模型是研究PCOS病理生理机制的一种理想的动物模型。卵巢组织内BDNF/Trk B的m RNA和蛋白表达水平的变化,受体Trk B在卵母细胞上的表达随着卵泡发育的成熟逐渐减弱,及Trk B在PCOS模型组与对照组各级卵泡中颗粒细胞和卵母细胞上的表达差异提示BDNF/Trk B可能通过自分泌或旁分泌的方式促使PCOS卵泡发育障碍。
【关键词】：多囊卵巢综合征(PCOS) 动物疾病模型 脑源性神经营养因子(BDNF) 酪氨酸激酶受体B(TrkB) 卵泡发育障碍
【学位授予单位】：广东药学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R711.75
【目录】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 第1章 序言11-18
• 1 多囊卵巢综合征概述11-14
• 1.1 多囊卵巢综合征流行病学研究11-12
• 1.2 PCOS不孕治疗12-13
• 1.3 PCOS与卵泡发育障碍13-14
• 2 脑源性神经营养因子及其受体的研究现状14-16
• 2.1 脑源性神经营养因子的结构与生理功能14
• 2.2 BDNF在卵泡发育中的作用14-15
• 2.3 BDNF与PCOS卵泡发育异常15-16
• 3 多囊卵巢综合征大鼠模型16-17
• 4 本课题研究目的及研究思路17-18
• 第2章 多囊卵巢综合征大鼠模型的建立18-29
• 1 引言18
• 2 实验材料18-19
• 2.1 实验对象18
• 2.2 药物与试剂18-19
• 2.3 实验仪器19
• 3 实验方法19-23
• 3.1 实验大鼠的饲养与分组19-20
• 3.2 多囊卵巢综合征模型的建立20
• 3.3 动情周期检测20-21
• 3.4 血清性激素检测21
• 3.5 卵巢组织形态学检查21-23
• 3.6 统计学分析23
• 4 结果23-27
• 4.1 大鼠体重和卵巢体积的变化23-24
• 4.2 动情周期变化24
• 4.3 血清性激素比较24-26
• 4.4 卵巢组织形态学表现26-27
• 5 讨论27-29
• 第3章 PCOS大鼠卵巢组织中BDNF及其受体Trk B的表达29-55
• 1 引言29
• 2 实验材料29-32
• 2.1 实验对象29
• 2.2 主要仪器设备29-30
• 2.3 主要试剂30-32
• 3 实验方法32-44
• 3.1 Real-time PCR法32-36
• 3.2 Western Blot（蛋白免疫印记）36-42
• 3.3 免疫组织化学法42-44
• 3.4 统计学分析44
• 4 结果44-52
• 4.1 Real time PCR检测BDNF/Trk B m RNA在卵巢组织中的表达44-46
• 4.2 Western blot法检测BDNF/Trk B在卵巢组织中的表达46-48
• 4.3 免疫组织化学法检测Trk B在不同发育阶段卵泡中的表达48-52
• 5 讨论52-55
• 全文小结55
• 创新点55-56
• 参考文献56-65
• 综述65-75
• 参考文献71-75
• 攻读硕士学位论文期间发表的论文及参加课题情况75-76
• 致谢76

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 陈甲;周华东;许志强;;脑源性神经营养因子前体的研究进展[J];中华老年心脑血管病杂志;2015年01期

2 申洪,陆药丹;免疫组织化学染色的定量方法研究[J];生物医学工程学杂志;1993年04期

3 付娟,陈士岭,邢福祺,张广亮,孔令红,朱亮,李红;脑源性神经营养因子及其受体在人卵巢的表达与卵泡发育的关系[J];中国免疫学杂志;2005年01期

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本文编号：901591