超声介导叶酸靶向携氧载药脂质微泡对乏氧卵巢癌细胞及巨噬细胞作用及机制研究

发布时间：2017-09-23 23:11

  本文关键词：超声介导叶酸靶向携氧载药脂质微泡对乏氧卵巢癌细胞及巨噬细胞作用及机制研究

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【摘要】：第一部分叶酸靶向携氧载紫杉醇脂质微泡的制备及其基本性质鉴定目的:制备一种新型的叶酸靶向携氧载紫杉醇脂质微泡,检测其基本特性。方法:采用机械振荡法制备叶酸靶向携氧载紫杉醇脂质微泡和普通脂质微泡,观察并比较两种微泡的稳定性,检测其粒径及粒度分布、电位、超声介导释氧能力、载药量、包封率及叶酸靶向携氧载紫杉醇脂质微泡表面叶酸连接情况。结果:叶酸靶向携氧载紫杉醇脂质微泡与普通脂质微泡基本特性大体一致。微泡的稳定性随着时间及温度变化而改变,两种微泡4℃可稳定存在两周,两周后微泡出现聚集现象,而37℃两种微泡仅能稳定存在2h,2h后微泡粒径变大,但无聚集现象。叶酸靶向携氧载紫杉醇脂质微泡平均粒径为(1.81±0.04)μm,Zeta电位分别为-(11.75±1.56)mv,载药量为(24.60±1.23)%,包封率为(86.10±3.47)%,而普通脂质微泡平均粒径为(1.78±0.05)μm,Zeta电位为-(14.93±0.50)mv,载药量为(26.72±2.31)%,包封率为(93.51±4.74)%。超声辐照能增加缺氧环境中微泡内氧气的释放。制备的叶酸靶向携氧载紫杉醇脂质微泡叶酸配体免疫荧光试验阳性,与FITC标记的叶酸抗体结合率高达(96.29±0.67)%,明显高于FITC标记的叶酸抗体与普通脂质微泡结合率(3.89±1.64)%(p0.05)。结论:成功制备了叶酸靶向携氧载紫杉醇脂质微泡,有望成为一种新型可用于超声控释的靶向药物载体。第二部分叶酸靶向携氧载紫杉醇脂质微泡对卵巢癌SKOV3细胞及巨噬细胞体外寻靶能力的鉴定目的:鉴定卵巢癌SKOV3细胞及巨噬细胞叶酸受体的表达情况,并观察TOPLMBs对这两种细胞体外寻靶能力。方法:体外培养卵巢癌SKOV3细胞及巯基乙酸盐诱导法获取小鼠腹腔巨噬细胞。免疫荧光法检测两种细胞叶酸受体的表达情况。观察叶酸靶向携氧载紫杉醇脂质微泡对卵巢癌SKOV3细胞及小鼠腹腔巨噬细胞结合情况,并设置普通脂质微泡组及游离叶酸干预组进行对照,评价叶酸靶向携氧载紫杉醇脂质微泡体外寻靶能力。结果:卵巢癌SKOV3细胞及小鼠腹腔巨噬细胞叶酸受体免疫荧光试验强阳性。体外寻靶显示,叶酸靶向携氧载紫杉醇脂质微泡组见微泡与SKOV3细胞大量且牢固结合,普通脂质微泡组和叶酸干预组几乎不结合;叶酸靶向携氧载紫杉醇脂质微泡组微泡能与巨噬细胞大量结合进而被吞噬,明显多于普通脂质微泡组及游离叶酸干预组。结论:叶酸受体在人卵巢癌SKOV3细胞和炎症诱导的小鼠腹腔巨噬细胞高表达;叶酸靶向携氧载紫杉醇脂质微泡对人卵巢癌细胞及巨噬细胞具备较强的体外靶向能力,有望成为未来卵巢癌及肿瘤相关巨噬细胞靶向治疗理想的分子探针。第三部分超声介导叶酸靶向携氧载紫杉醇脂质微泡对乏氧卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制及凋亡诱导作用及机制研究目的:构建乏氧卵巢癌SKOV3细胞株模型,研究超声联合叶酸靶向携氧载紫杉醇脂质微泡对乏氧卵巢癌SKOV3细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用及其机制。方法:采用Co Cl2化学法诱导构建乏氧SKOV3细胞株,将对数生长期乏氧SKOV3细胞进行不同处理,分组如下:a.培养液空白对照组b.紫杉醇组、c.紫杉醇+超声组、d.携氧载紫杉醇脂质微泡组、e携氧载紫杉醇脂质微泡+超声组、f.叶酸靶向携氧载紫杉醇脂质微泡组、g.叶酸靶向携氧载紫杉醇脂质微泡+超声组。应用MTT比色法检测细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡情况。PCR检测乏氧诱导转录因子HIF-1α和多药耐药基因MDR-1的表达,Western blot检测HIF-1α蛋白和P-gp糖蛋白的表达情况。结果:随着作用时间的延长,各处理因素对乏氧SKOV3细胞增殖抑制作用逐渐增强。其中,携氧载紫杉醇脂质微泡+超声组及叶酸靶向携氧载紫杉醇脂质微泡+超声组对乏氧SKOV3细胞的抑制作用明显,而叶酸靶向携氧载紫杉醇脂质微泡+超声组更为显著,24 h,48 h和72 h分别为(64.61±12.53)%、(79.34±7.39)%及(89.83±5.61)%,显著高于同一时间点的其余各处理组(P0.05),该处理组细胞凋亡率为(49.20±7.18)%,亦明显高于其余各组(p0.05)。PCR及Western blot检测结果显示,携氧载紫杉醇脂质微泡+超声组及叶酸靶向携氧载紫杉醇脂质微泡+超声组HIF-α及MDR-1基因及蛋白的表达有明显下调趋势,其中以叶酸靶向携氧载紫杉醇脂质微泡+超声组下调最为显著,差异有统计学意义(P0.05),但与携氧载紫杉醇脂质微泡+超声组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:超声联合叶酸靶向携氧载紫杉醇微泡可明显提高紫杉醇对乏氧SKOV3细胞的杀伤能力,其机制可能与下调HIF-1α及MDR-1基因及蛋白的表达,从而增加细胞对紫杉醇的敏感性有关。第四部分超声介导叶酸靶向携氧载紫杉醇脂质微泡对巨噬细胞杀伤作用的研究目的:探讨超声联合叶酸靶向携氧载紫杉醇脂质微泡对体外培养小鼠腹腔巨噬细胞杀伤作用。方法:巯基乙酸盐诱导法获取小鼠腹腔巨噬细胞,过夜孵育后,细胞分为7组:a.对照组、b.紫杉醇组、c.组紫杉醇+超声组、d.携氧载紫杉醇脂质微泡组、e.携氧载紫杉醇脂质微泡+超声组、f.叶酸靶向携氧载紫杉醇脂质微泡组、g.叶酸靶向携氧载紫杉醇脂质微泡+超声组。细胞处理后24h,MTT比色法检测巨噬细胞的存活率,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:各处理因素对巨噬细胞具有不同程度的杀伤作用,随着时间延长,细胞存活率逐渐下降,其中叶酸靶向携氧载紫杉醇脂质微泡组细胞的存活率降低最为显著,24h、48h、72h分别为(49.72±4.60)%,(44.99±7.19)%和(32.17±6.73)%,明显低于其余各处理组,差异有统计学意义(P0.05),该组24h细胞凋亡率为(48.36±9.39)%,明显高于其余处理组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:超声介导叶酸靶向携氧载紫杉醇脂质微泡对巨噬细胞有一定的杀伤作用,其机制可能是叶酸受体介导巨噬细胞特异性吞噬靶向携氧载紫杉醇脂质微泡,进而增强超声介导的机械效应导致细胞损伤。
【关键词】：叶酸 携氧载紫杉醇 卵巢癌 巨噬细胞
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.31;R454.3
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-7
• 中文摘要7-11
• 英文摘要11-17
• 前言17-19
• 第一部分 叶酸靶向携氧载紫杉醇脂质微泡的制备及其基本性质鉴定19-26
• 1 材料和方法19-23
• 2 结果23-24
• 3 讨论24-25
• 4 小结25-26
• 第二部分 叶酸靶向携氧载药脂质微泡对卵巢癌SKOV3细胞及巨噬细胞体外寻靶能力的鉴定26-31
• 1 材料和方法26-29
• 2 结果29
• 3 讨论29-30
• 4 小结30-31
• 第三部分 超声介导叶酸靶向携氧载紫杉醇脂质微泡对乏氧卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制及凋亡诱导作用及机制研究31-43
• 1 材料和方法31-36
• 2 结果36-40
• 3 讨论40-42
• 4 小结42-43
• 第四部分 超声介导叶酸靶向携氧载紫杉醇脂质微泡对巨噬细胞杀伤作用的研究43-48
• 1 材料和方法43-44
• 2 结果44-46
• 3 讨论46-47
• 4 小结47-48
• 参考文献48-52
• 全文总结52-53
• 附图53-61
• 本课题创新与不足之处61-62
• 文献综述62-72
• 参考文献68-72
• 致谢72-73
• 攻读硕士期间发表的论文及参研基金情况73

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

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本文编号：907989