宫内高糖对胎盘炎症因子及子代胰腺Igf2基因印记的影响

发布时间：2017-09-25 00:38

  本文关键词：宫内高糖对胎盘炎症因子及子代胰腺Igf2基因印记的影响

  更多相关文章： 宫内高糖 胎鼠胰腺 Igf2 甲基化 胰岛素 妊娠期糖尿病 炎症因子 高糖 人类滋养细胞系 白细胞介素6 Dnmt1 Trim28 CpG岛

【摘要】：第一部分妊娠期糖尿病对胎盘炎症因子的影响 目的：研究妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus, GDM)患者胎盘合成释放炎症因子改变,明确高糖环境对胎盘滋养细胞合成释放炎症因子的影响。材料和方法：获取临床妊娠期糖尿病和正常对照组(Control, C)胎盘组织,采用实时定量PCR、酶联免疫吸附试验检(ELISA)测胎盘炎症因子合成释放改变。体外以生理糖浓度(5mmol/L)和高糖环境(25mmol/L)培养人类滋养细胞系(HTR8/SVneo)48h再加脂多糖(lipopolysaccharide, LPS,1μg/ml)刺激24h,酶联免疫吸附试验检测上清炎症因子释放。 结果：GDM组胎盘较C组相比,抗炎因子脂联素(Adiponectin, ADIPOQ)、白细胞介素5(Interleukin5, IL5)、白细胞介素13(Interleukin13, IL13)信使RNA (message RNA, mRNA)表达下降(p0.05),促炎因子白细胞介素6(Interleukin6, IL6)、白细胞介素8(Interleukin8, CXCL8) mRNA表达增加(p0.05),且白细胞介素6(Interleukin6, IL-6)在蛋白水平合成增加(p0.05)。体外实验高糖培养人类滋养细胞系,结果其释放IL-6增加(p0.05),Adiponectin减少(p0.05)。结论：高糖是引起胎盘和人类滋养细胞合成释放炎症因子发生改变,炎症反应亢进的主要原因。 第二部分妊娠期糖尿病对小鼠胎鼠胰腺Igf2表达的影响及调控机制 目的：研究宫内高糖环境下小鼠胎盘炎症反应改变及胎鼠胰腺胰岛素储备功能、印记基因Igf2表达、Igf2差异甲基化区(differentially methylated region, DMR)的甲基化状况及相关甲基化调节酶的改变,分析糖尿病发病相关基因的表达差异及可能的调节机制。 材料和方法：建立妊娠期糖尿病小鼠模型,在孕18.5天取出对照组(F1-Control)与实验组(F1-GDM)胎盘、胎鼠胰腺(fetal mouse pancreas, FMP)进行比较,实时定量PCR检测胎盘炎症因子表达、胎鼠胰腺胰岛素、印记基因Igf2、甲基化调控相关酶Dnmt1、Dnmt3a、Trim28、Tet1、Aicda表达,免疫组化观察GDM胎鼠胰腺内胰岛素合成情况,并用MassARRAYTM EpiTYPER定量甲基化平台对Igf2甲基化水平进行分析。 结果：宫内高糖环境的子一代胎盘白细胞介素6(Interleukin6,I16)表达增加(p0.05),胰腺胰岛素表达合成减少(p0.05),印记基因Igf2表达下降(p0.05),Igf2DMR2区5个CpG位点甲基化程度较对照组明显增高(p0.05),胚胎发育期甲基化维持重要相关酶Dnmt1、Trim28表达上调(p0.05),去甲基化相关酶Aicda表达下降(p0.05)。 结论：宫内高糖可致小鼠胎盘116表达改变,是引起胎盘炎症环境改变的主要原因。同时胎鼠胰腺印记基因Igf2表达降低,可能是胎鼠胰岛素储备功能受损的原因之一。宫内高糖环境胎鼠胰腺Igf2DMR2高甲基化状态是引起Igf2表达降低的主要机制。胎鼠胰腺甲基化稳态关键酶Dnmt1、Trim28表达升高及Aicda表达降低,是胰腺印记基因Igf2甲基化水平改变的主要原因。 第三部分白细胞介素6和高糖对胎鼠胰腺的影响 目的：探索宫内改变环境中影响胎鼠表观遗传变化的主要原因及其可能机制。 材料和方法：体外原代培养孕18.5天胎鼠胰腺组织C (glucose5mmol/L), C+IL-6(glucose5mmol/L+IL-64000pg/ml), HG (glucose25mmol/L), HG+IL-6(glucose25mmol/L+IL-64000pg/ml)48h后,利用实时定量PCR检测这四组胰腺印记基因Igf2、胰岛素、Dnmt1、Trim28、Aicda表达改变,免疫荧光观察不同培养条件下胎鼠胰腺内胰岛素合成情况,再次利用MassARRAYTM EpiTYPER定量甲基化平台对Igf2甲基化水平进行分析。 结果：IL-6或HG培养均可使胎鼠胰腺胰岛素合成减少(p0.05),Igf2表达降低(p0.05), Dnmt1、Trim28表达升高(p0.05),其中IL-6对胰岛素、Igf2、Dnmt1的作用更为明显,而HG对于Trim28的作用更为显著,Aicda表达没有显著差异(p0.05)。IL-6或HG对Igf2DMR2区有4个CpG位点在IL-6或HG培养条件下出现高甲基化(p0.05),其中IL-6对CpG_5、CpG_7、CpG_11的作用更为明显,而HG对于CpG_4的作用更为显著, 结论：高糖和高IL-6对胎鼠胰腺Igf2表达和Igf2DMR2甲基化状态均有影响,IL-6主要是通过上调Dnmt1,高糖是主要通过影响Trim28使得Igf2DMR2甲基化水平升高的,并成为引起胎鼠胰腺功能损伤及出生后长期不良结局的的机制之一。
【关键词】：宫内高糖 胎鼠胰腺 Igf2 甲基化 胰岛素 妊娠期糖尿病 炎症因子 高糖 人类滋养细胞系 白细胞介素6 Dnmt1 Trim28 CpG岛
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R714.256
【目录】：

• 致谢5-8
• 中文摘要8-11
• Abstract11-14
• 中英文缩写词对照表14-15
• 目次15-17
• 第一部分 妊娠期糖尿病对胎盘炎症因子的影响17-33
• 引言17-19
• 材料与方法19-26
• 结果26-28
• 讨论28-30
• 结论30-31
• 参考文献31-33
• 第二部分 宫内高糖小鼠胎盘功能、胎鼠胰腺功能、IGF2表达及调控机制33-51
• 引言33-35
• 材料与方法35-42
• 结果42-46
• 讨论46-48
• 结论48-49
• 参考文献49-51
• 第三部分 白细胞介素6和高糖对胎鼠胰腺的影响51-65
• 引言51-53
• 材料和方法53-56
• 结果56-61
• 讨论61-62
• 结论62-63
• 参考文献63-65
• 全文总结65-66
• 综述66-81
• 参考文献77-81
• 个人简介81-82

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 蒋文跃;韩巍;李志新;;成人疾病胎源说的证据及机制[J];北京大学学报(医学版);2007年01期

2 回圆敕;关玉峰;李政;孙崴;张霞;张萍;苏本利;;PGC-1α基因Gly482Ser多态性与2型糖尿病发病的相关性研究[J];大连医科大学学报;2009年03期

3 王秀敏;赵正言;;代谢综合征、健康与疾病的发育起源和表观遗传学[J];中国儿童保健杂志;2010年08期

4 韦玮;夏宁;李莹芳;韦国海;韦力;梁瑜祯;;甲基化转移酶抑制剂对2型糖尿病KKAy小鼠血糖和体重的影响[J];广西医学;2013年06期

5 何平;李诚;;妊娠期糖尿病与婴儿过敏性疾病相关性的研究[J];妇产与遗传(电子版);2013年03期

6 林穗青;张丹;彭咏梅;程蔚蔚;;GDM孕中、晚期及子代胰岛素抵抗与正常妊娠的对照研究[J];中国妇产科临床杂志;2013年05期

7 吕雅素;左常婷;;妊娠期糖尿病免疫遗传学研究进展[J];国际妇产科学杂志;2013年06期

8 康姚洁;王煊;;丙型肝炎病毒感染致糖代谢异常的相关机制研究进展[J];实用肝脏病杂志;2014年01期

9 张霹栻;王斌;王军;魏艳玲;孙文静;吴林;罗茜;陈东风;;5-甲基胞嘧啶羟化酶TET1在肝再生时卵圆细胞向肝细胞分化过程中的作用[J];第三军医大学学报;2014年08期

10 于宁;陈叙;张志坤;;妊娠期血浆脂联素水平变化与妊娠期糖尿病的相关性研究[J];国际妇产科学杂志;2014年02期

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 侯粲;糖尿病患者外周血细胞组蛋白修饰研究[D];中南大学;2011年

2 王妍平;宫内生长受限胎儿的肾脏发育及其相关机制探讨[D];天津医科大学;2011年

3 张晔;胰岛素通过miR-208介导的p21下调刺激血管平滑肌细胞增殖的实验研究[D];第三军医大学;2011年

4 邵伟娟;胰岛素对小鼠早期胚胎发育的程序化影响及相关分子机理的研究[D];南京农业大学;2007年

5 崔安芳;饥饿诱导的KLF9通过诱导PGC-1α调节肝脏糖异生[D];北京协和医学院;2012年

6 李一君;自身免疫糖尿病外周血CD4~+T细胞DNA甲基化异常的研究[D];中南大学;2011年

7 王斌;四川凉山地区彝族和汉族人群2型糖尿病患病率及其影响因素研究[D];北京协和医学院;2013年

8 马培;虎杖生药学研究[D];北京协和医学院;2013年

9 刘向明;肝癌的发生与胰岛素抵抗的关系[D];天津医科大学;2012年

10 尹晓玲;滤泡辅助性T细胞促进IgAN患儿IgA抗体类别转换及Gd-IgAl生成[D];华中科技大学;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 陈果;SET7/9和LSD1在2型糖尿病大血管病变中的作用[D];泸州医学院;2011年

2 任时;孕期糖代谢异常大鼠模型的建立及对子代糖代谢的影响[D];中国医科大学;2007年

3 刘晓琳;孕期宫内环境与新生儿出生情况的相关性研究[D];浙江大学;2012年

4 蒋艳玲;1，，25-二羟维生素D3对HaCaT细胞增殖活性的影响及其表观遗传调控机制研究[D];中南大学;2012年

5 张奕;n-3、n-6多不饱和脂肪酸对3T3-L1脂肪细胞脂联素表达的影响及PPARγ介导的机制[D];南方医科大学;2012年

6 李永辉;miR-29a在动脉粥样硬化发生发展中的作用及其分子机制[D];河北医科大学;2013年

7 计晨琳;基于脂代谢途径研究哺乳期营养过度致大鼠NAFLD的程序化机制[D];南京医科大学;2013年

8 罗晓雷;宫内发育受限大鼠海马组织中GHSR的表达变化及其与学习记忆、情感行为的关系[D];河北医科大学;2013年

9 李莹芳;地西他滨缓解葡萄糖毒性对胰岛β细胞株NIT-1细胞的作用[D];广西医科大学;2013年

10 韦玮;甲基转移酶抑制剂地西他滨对2型糖尿病小鼠能量代谢和胰岛素传导通路的影响[D];广西医科大学;2013年

本文编号：914389