调控Toll样受体2_核转录因子-κB信号通路对大鼠呼吸机相关性肺损伤的影响

发布时间：2017-09-05 15:12

  本文关键词：调控Toll样受体2_核转录因子-κB信号通路对大鼠呼吸机相关性肺损伤的影响

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【摘要】：目的：探讨TLR2单克隆抗体预处理后,Toll样受体2/核转录因子-KB (TLR2/NF-KB)信号通路对呼吸机相关性肺损伤(VILI)的影响。方法：分体内实验和体外实验两部分。将60只雄性SD大鼠按随机数字表法分为6组,每组10只。体内实验：A组：8ml/kg VT行机械通气；B组：经气管导管缓慢滴入25ug/ml浓度的TLR2 mAb (10ug/kg)干预后,40ml/kg潮气量(VT)行机械通气；C组：滴入相同量生理盐水干预后,40ml/kg VT行机械通气。各组于通气4h后提取大鼠血清、支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织。体外部分：D组大鼠行8ml/kg VT机械通气4h后提取肺泡巨噬细胞培养,E、F组大鼠行40ml/kg VT机械通气4h后提取肺泡巨噬细胞培养。D组：正常对照组,给予相同量PBS干预及刺激；E组：给予25ug/ml TLR2 mAb干预,1h后给予TNF-α刺激因子；F组：给予PBS干预,1h后给予TNF-α刺激因子。三组细胞培养16h后分别收集细胞和细胞培养液。检测方法包括计算肺组织干湿比重(W/D),镜下观察肺组织病理学及细胞超微结构改变；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养液、血清和BALF中白介素(IL-1β、IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平；实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(WB)分别检测肺组织和肺泡巨噬细胞TLR2、NF-κB. MyD88 ml RNA及蛋白的表达。结果：显微镜下观察显示：A、B组肺组织无明显病理学改变,肺泡巨噬细胞、工型和Ⅱ型肺泡上皮细胞超微结构无明显损伤;C组可见明显肺泡腔融合,肺间隔增宽,大量炎性细胞聚集,肺泡巨噬细胞、Ⅰ型和Ⅱ型肺泡上皮细胞细胞膜破坏,胞质大量空泡化,细胞器破坏严重,细胞核固缩,核周隙明显增宽。A、B组W/D比值及血清和BALF中炎性细胞因子水平均较C组明显降低,差别有统计学意义(P≤0.05；D、E组细胞培养液中炎性细胞因子水平较F组明显降低,差异有统计学意义(P≤0.05)。A、B组肺组织TLR2. NF-κB、MyD88 mRNA及蛋白表达均明显低于.C组；D、E组肺泡巨噬细胞上述因子的mRNA及蛋白表达均明显低于F组,差异有统计学意义(P≤0.05)。结论：TLR2-mAb预处理通过阻断TLR2/NF-κB信号通路可减轻呼吸机相关性肺损伤模型大鼠炎症因子的释放,在一定程度上减轻VILI。
【关键词】：呼吸相关性肺损伤 Toll样受体2 单克隆抗体 核转录因子κB 样分化因子88 肺泡巨噬细胞
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R563
【目录】：

• 主要英文缩略词7-9
• 中文摘要9-11
• 英文摘要11-14
• 前言14-17
• 第一章 实验材料17-21
• 1、主要实验仪器17-18
• 2、主要实验试剂18-21
• 第二章 实验方法21-44
• 1、动物来源及实验分组21
• 2、体内动物模型建立21-22
• 3、体外动物模型建立及巨噬细胞分离提取22-23
• 4、纳入实验大鼠标准23-24
• 5、体内实验标本采集和处理24-25
• 6、体外实验巨噬细胞培养及干预25
• 7、体外实验标本的采集25
• 8、肺干湿比重(W/D)的检测25-26
• 9、透射电镜观察肺泡超微结构26-27
• 10、HE染色观察肺组织大体形态27-29
• 11、血清、BALF、和培养上清中TNF-α、IL-1β、IL-6的检测29-33
• 12、肺组织、肺泡巨噬细胞总RNA的提取33-35
• 13、肺组织、肺泡巨噬细胞中TLR2、NF-κB、MyD88 mRNA的检测35-39
• 14、肺组织、肺泡巨噬细胞总蛋白的提取和浓度检测39-40
• 15、肺组织、肺泡巨噬细胞中TLR2、NF-κB、MyD88蛋白检测40-44
• 16、统计学处理44
• 第三章 结果44-52
• 1、各组肺组织干湿比重的比较44
• 2、各组肺组织的大体形态44-45
• 3、肺泡各种细胞电镜下超微结构45-48
• 4、血清、BALF和培养上清中炎性因子的表达48-50
• 5、WB检测TLR2、NF-κB、MyD88蛋白的表达50-51
• 6、肺组织、肺泡巨噬细胞目的基因的表达51-52
• 第四章 讨论52-57
• 第五章 结论57-58
• 参考文献58-65
• 综述65-81
• 参考文献74-81
• 攻读硕士学位期间发表论文81-82
• 致谢82-84
• 附件84-90

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

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本文编号：798688