抗人软骨寡聚基质蛋白单克隆抗体的研制及表位鉴定

发布时间：2017-10-19 07:22

  本文关键词：抗人软骨寡聚基质蛋白单克隆抗体的研制及表位鉴定

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【摘要】：目的:为了揭示循环血液中存在的软骨寡聚基质蛋白(Cartilage Oligomeric Matrix Protein,COMP)片段,探索COMP逃避自身免疫耐受的途径及机制,需制备高效、专一的识别COMP不同结构域的单克隆抗体。方法:利用真核表达系统对人COMP进行了一系列的表达、并用亲和层析法结合离子交换层析法进行纯化。纯化的COMP为抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术结合有限稀释传代法筛选得到稳定分泌抗人COMP单克隆抗体的杂交瘤细胞株,用COMP单结构域片段结合生物信息学方法分析鉴定单克隆抗体结合表位。用不同种属来源的COMP分析单克隆抗体结合表位的保守性。结果:COMP及单结构域片段为分泌到细胞外的可溶性分子利于蛋白的纯化,筛选获得4株稳定分泌抗人COMP单克隆抗体细胞株,4株单克隆抗体的亚型为IgG1,经COMP单结构域片段检测证明4株单克隆抗体识别不同的表位,表位预测软件初步确定4株单克隆抗体识别表位所在区域,间接ELISA及免疫组化证实其中3株单克隆抗体与不同种属来源的COMP有较好的结合特性。结论:成功制备了4株识别不同表位的抗COMP单克隆抗体,为揭示血液中存在的COMP片段和进一步研究COMP逃避自身免疫耐受机理提供了研究工具。
【作者单位】： 华中师范大学生命科学学院
【关键词】： 软骨寡聚基质蛋白 单克隆抗体 表位 类风湿性关节炎
【基金】：国家自然科学基金(No.30972693) 38批留学回国人员启动基金 中央高校基本科研业务费专项资金(CCNU11A02011)等基金资助
【分类号】：R392.11
【正文快照】： 类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一种以慢性关节损害为主要表现并可累及全身各器官的复杂综合症,RA发病的自身免疫学说已被国内外广大学者所普遍接受。自身靶抗原的发现、自身抗体的存在以及与MHCⅡ类分子的某些等位基因型(如HLA-DRB1*0401、DRB1*0404、DRB1*0408

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本文编号：1059783