多西环素调控的重组杆状病毒载体Ac-EGFP及Ac-HGF的构建

发布时间：2017-10-22 03:31

  本文关键词：多西环素调控的重组杆状病毒载体Ac-EGFP及Ac-HGF的构建

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【摘要】：目的将Tet-On系统与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)或肝细胞生长因子(HGF)共同构建于一新型重组杆状病毒载体,并以不同浓度的多西环素(DOX)调控EGFP及HGF表达。方法酶切重组质粒pFast-Tet、pTRE-EGFP和pTRE-HGF,回收目的片段后连接pFast-Tet,分别转化含有AcMNPV Bacmid和helper质粒的DH10Bac感受态细胞,筛选后提取Bacmid DNA并鉴定(命名为Ac-EGFP和Ac-HGF)。将Ac-EGFP和Ac-HGF转染骨髓间充质干细胞,加入不同浓度的DOX调控EGFP(DOX浓度为0、200、500、1000ng/mL)和HGF(DOX浓度为0、10、100、500、1000、1200ng/mL)的表达。在荧光显微镜下观察EGFP的表达,用ELISA法检测HGF的表达量。结果经鉴定EGFP、HGF与Tet-On系统成功构建在同一杆状病毒载体,且在骨髓间充质干细胞中具有较高的转染率。在较高浓度DOX调控下改造后的重组杆状病毒可高表达EGFP和HGF,低浓度或无DOX时表达量逐渐减低。结论本研究证实可将Tet-On系统与EGFP或HGF共同构建于一新型重组杆状病毒载体,改造后的重组杆状病毒能稳定、高效转染骨髓间充质干细胞,不同浓度的DOX可调控EGFP及HGF的表达,无DOX时呈低本底。
【作者单位】： 南昌大学第二附属医院骨科;赣州市人民医院神经内科;南昌大学第一附属医院骨科;
【关键词】： 增强型绿色荧光蛋白 肝细胞生长因子 Tet-on系统 骨髓 间质干细胞 杆状病毒
【基金】：国家自然科学基金(81060147)~~
【分类号】：R341
【正文快照】： 杆状病毒载体系统已广泛应用于表达外源性重组蛋白,在杆状病毒表达系统内构建绿色荧光蛋白(GFP)或其他外源基因的转移载体和重组病毒已有报道[1-2],但目前尚未有在同一杆状病毒内共同构建四环素开关系统Tet-On与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)或肝细胞生长因子(HGF)的可调节杆状病

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本文编号：1076585