HPV18E7重组质粒的构建及在大肠杆菌中的表达优化

发布时间：2017-12-18 09:05

  本文关键词：HPV18E7重组质粒的构建及在大肠杆菌中的表达优化

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【摘要】：目的构建HPV18E7基因重组质粒,并探索其在大肠杆菌中的最佳表达条件。方法以提取的HeLa细胞株中的DNA为模板PCR扩增HPV18E7基因;将HPV18E7基因与载体pET-32a(+)连接为重组质粒pET-32a(+)-HPV18E7;将该重组质粒转入大肠杆菌BL21-DE3-pLysS细胞中,探索优化表达的条件,以获得大量HPV18E7致癌蛋白。结果 PCR扩增的目标基因大小序列与HeLa细胞中的HPV18E7基因的大小序列一致。用LB培养基,IPTG和乳糖诱导表达显示不同浓度、不同温度、不同诱导起始量等表达量均不高,尝试用ZYM-5052自动诱导培养基诱导,HPV18E7融合蛋白的表达量远远高于用异丙基-β-D-硫代吡U半乳糖苷(IPTG)和乳糖诱导表达的表达量。结论测序正确的HPV18E7重组质粒在自动诱导培养基ZYM-5052中获得远远高于用异丙基-β-D-硫代吡U半乳糖苷(IPTG)和乳糖诱导表达的HPV18E7融合蛋白。
【作者单位】： 重庆理工大学药学与生物工程学院;南京大学生命科学学院;
【基金】：重庆市教育委员会科技研究项目(KJ110820)
【分类号】：R378
【正文快照】： 高危型人乳头状瘤病毒(human papilloma virus,HPV)持续感染宫颈是引起宫颈癌及癌前病变的直接病因[1]。HPVE7蛋白为宫颈癌发展的潜在标志物,可以用新型双抗夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测到各型HPV的重组E7蛋白以及宫颈涂片和宫颈癌细胞裂解物中的HPVE7蛋白[2]。HPV很难

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6 魏n

本文编号：1303570