出生后小鼠牙不同发育期β-catenin和DKK1表达特性研究
发布时间：2018-01-12 17:12
本文关键词：出生后小鼠牙不同发育期β-catenin和DKK1表达特性研究 出处：《吉林大学》2017年硕士论文 论文类型：学位论文
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【摘要】：目的:1、观察出生后不同时间点小鼠牙齿发育形态特点。2、观察出生后小鼠牙发育各阶段β-连环蛋白(β-catenin)和Dickkopf-1(DKK1)的时空表达特点,推测β-catenin和DKK1在牙体组织和牙周组织发育中所起到的作用,为阐明Wnt信号通路调控牙发育机制提供证据。方法:隔天中午取出生后第0.5天—30.5天的昆明小鼠并按时间分组,每组3只。颈椎脱臼法处死小鼠,仔细剥离含有下颌第一磨牙的下颌骨组织,浸泡于4%多聚甲醛磷酸盐缓冲液中1晚进行固定,流水冲洗后置于10%乙二胺四乙酸二钠(EDTA)溶液中,存放于4℃冰箱内进行脱钙,根据组织硬度不同脱钙时间1—30天不等。脱钙完成后用磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗,常规组织脱水,石蜡包埋,制作5μm厚含有下颌第一磨牙的组织切片。采用苏木素-伊红(HE)染色法观察下颌第一磨牙的发育状态,应用免疫组化染色法显示β-catenin和DKK1在牙体组织和牙周组织中的表达特点。结果:1、成功的制作了出生后小鼠各时间点包含下颌第一磨牙的组织切片,并通过HE染色观察了出生后小鼠下颌第一磨牙在各时间点的发育情况。2、免疫组化方法观察了出生后小鼠牙体和牙周组织中β-catenin和DKK1的时空表达特性。(1)小鼠出生后第0.5天时,β㧟catenin在牙髓组织中无表达,在成牙本质细胞、成釉细胞和釉结节中轻微表达。4.5天时,β㧟catenin在成牙本质细胞和成釉细胞中表达加深,上皮根鞘处无表达。6.5天时,牙髓中β㧟catenin已经有轻微表达,此后其表达逐渐加深。12.5天时,牙髓中β㧟catenin表达加深,呈现阳性表达。此时牙根雏形已经形成,在新形成的牙周膜中β㧟catenin也呈阳性表达。14.5㧟26.5天时,β㧟catenin在牙髓牙和周膜中表达稳定,一直呈现强阳性表达,后期牙槽骨中也出现阳性表达。30.5天时,牙周膜和牙髓中的β㧟catenin表达均减弱。(2)小鼠出生后第0.5天时,牙胚组织中几乎没有DKK1表达。6.5天时,成釉细胞、成牙本质细胞和前期牙本质中DKK1弱阳性表达,上皮根鞘组织呈现轻度表达,表达逐渐加深。12.5天时,DKK1在成釉细胞、成牙本质细胞、前期牙本质和牙周膜中均呈阳性表达。14.5—18.5天时,成牙本质细胞和前期牙本质中DKK1仍呈阳性表达,含量基本未变化,而牙周膜中DKK1表达增强。20.5—24.5天时,牙周膜中DKK1成强阳性表达,值得注意的是,在根部的细胞性牙骨质和牙槽骨中可见DKK1阳性表达的细胞。此种表达特点一直延续至第30.5天,而牙髓组织在各时期均未见DKK1阳性表达。结论:采用HE染色的方法,成功观察了出生后小鼠牙齿的发育过程,为牙齿发育方面的研究奠定了组织学基础。出生后小鼠牙不同发育期β㧟catenin和DKK1在牙体组织和牙周组织中的表达存在一定的规律性,本研究结果为阐明Wnt信号通路调控牙发育机制提供了证据。
[Abstract]:Objective to observe the morphological characteristics of tooth development in mice at different time points after birth. The temporal and spatial expression of 尾 -catenin and Dickkopf-1 DKK1 in postnatal mouse teeth were observed. The role of 尾 -catenin and DKK1 in the development of dental and periodontal tissues was speculated. Methods: Kunming mice from 0.5 to 30.5 days after birth were collected at noon the next day and divided into groups according to time. Three mice in each group were killed by cervical dislocated method. The mandibular bone tissue containing the first molar of mandible was carefully removed and fixed in 4% paraformaldehyde phosphate buffer solution for 1 night. Income was washed and placed in 10% ethylenediamine tetraacetic acid disodium EDTA solution and stored in refrigerator at 4 鈩，
本文编号：1415178
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