潜伏相关基因UL138在人巨细胞病毒潜伏—激活中的调控及机制

发布时间：2018-01-15 14:36

本文关键词：潜伏相关基因UL138在人巨细胞病毒潜伏—激活中的调控及机制　出处：《浙江大学》2015年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)是目前公认的引起先天性感染最常见的病原体之一。先天性人巨细胞病毒感染会造成流产、死胎、胎儿畸形、宫内发育迟缓等严重后果。HCMV侵入机体后,具有潜伏-激活的感染特性。绝大多数的HCMV母婴传播由母体潜伏病毒的激活导致,因此潜伏-激活在先天性HCMV感染中的重要性尤为突出。UL138基因是重要的HCMV潜伏相关基因。一方面,UL138基因编码的蛋白可能通过限制T细胞对感染细胞的识别,从而发挥促进病毒潜伏的作用。另一方面UL138基因编码的蛋白能促进由TNF-α信号通路介导的潜伏病毒激活的过程。因此,目前仍不清楚UL138基因在HCMV潜伏-激活中的确切角色。另外研究发现,病毒宿主细胞的分化状态对.HCMV能否增殖感染起了关键性作用。迄今为止,有关UL138基因对潜伏感染细胞分化影响的研究未见报道。本研究以UL138基因作为研究对象,通过上调和下调UL138基因表达,探索UL138基因对潜伏感染状态和宿主细胞分化状态的影响,以期为UL138基因在HCMV潜伏-激活作用机制提供新思路。研究目的(1)阐明潜伏相关基因UL138在HCMV潜伏-激活感染中的调控作用;(2)阐明潜伏相关基因UL138是否影响宿主细胞分化状态。研究方法和结果(1)构建实验室HCMV潜伏感染模型用HCMVTowne株感染单核细胞系THP-1作为潜伏组,用HCMVTowne株感染成纤维细胞HEF作为增殖对照组。①监测感染细胞内潜伏相关基因UL81-82ast的表达,确定病毒是否成功感染细胞。结果显示:潜伏相关基因UL81-82ast在增殖组和潜伏组的表达都逐渐上升。②监测感染细胞内病毒DNA复制情况和增殖相关基因UL122、UL123表达情况,确定是否建立实验室HCMV潜伏感染模型。结果显示:随着感染天数增加,增殖组病毒DNA量逐渐上升,潜伏组病毒DNA量逐渐下降;增殖组中UL122和UL123基因表达都一直增加;而潜伏组中这两个基因的转录和蛋白表达呈一过性,感染后期检测不到。(2)UL138基因在HCMV潜伏-激活中的调控作用①构建UL138基因的慢病毒过表达载体及干扰载体,侵染单核细胞建立UL138基因过表达细胞株和UL138基因干扰细胞株。②以实验室潜伏感染模型为对照,监测UL138基因过表达及干扰后感染细胞内病毒DNA水平及增殖相关基因UL122、UL123表达的变化,评价潜伏感染状态是否改变。结果显示:与对照组相比,UL138过表达后,HCMVDNA拷贝数下降,HCMV复制的关键基因UL122和UL123表达下降;UL138表达受到干扰后,HCMV DNA拷贝数上升,HCMV复制的关键基因UL122和UL123表达增加。(3)UL138基因对潜伏感染细胞分化的影响以实验室潜伏感染模型为对照,监测UL138基因过表达及干扰后染前后以下内容,从而判断UL138基因对潜伏感染细胞分化的影响。①HCMV宿主细胞形态;结果显示:与对照组相比,UL138过表达后,宿主细胞伸展充分,突起明显;UL138表达受到干扰后,宿主细胞分化未见明显变化。② HCMV宿主细胞表面分化抗原;结果显示:与对照组相比,UL138过表达后,宿主细胞表面分化抗原CD14表达下降;UL138表达受到干扰后,宿主细胞表面分化抗原CD45表达下降。③HCMV宿主细胞分化炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β和TGFβ1表达水平的变化。结果显示:与对照组相比,UL138过表达后,分化相关的炎症因子TGFβ1表达增加;UL138表达受到干扰后,分化相关的炎症因子未见明显变化。结论(1)HCMVTowne株感染单核细胞THP-1后成功建立HCMV潜伏感染模型。(2)UL138基因表达上调后促进或维持病毒的潜伏感染。(3)UL138基因表达上调后促进宿主细胞分化。
[Abstract]:Human cytomegalovirus ( HCMV ) is one of the most common pathogens causing congenital infection . ( 3 ) The effect of UL138 gene on cell differentiation of latent infection was determined by laboratory latent infection model .

【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R373

【参考文献】