RhaFGF联合rhEGF促进兔耳全层皮肤缺损创面愈合的实验研究

发布时间：2018-02-24 08:48

  本文关键词： 重组人酸性成纤维细胞生长因子 重组人表皮细胞生长因子 重组牛碱性成纤维细胞生长因子 创面愈合 瘢痕　出处：《重庆医科大学》2011年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:观察重组人酸性成纤维细胞生长因子(rhaFGF)联合重组人表皮细胞生长因子(rhEGF)对创面愈合的影响并探讨其可能的机理。 方法:①造模及分组:建立新西兰大耳白兔兔耳全层皮肤缺损模型,先后进行浓度梯度实验和联合用药实验。在浓度梯度实验中,建立兔耳全层皮肤缺损创面模型,随机分为A组(rhaFGF 60U/cm~2)、B组(rhaFGF 90U/cm~2)、C组(rhEGF 20U/cm~2)、D组(rhEGF 40U/cm~2)和E组(等量生理盐水)共5组。根据浓度梯度实验结果设定联合用药实验试剂的浓度。联合用药实验建立模型同前,随机分为F组(rhaFGF 60U/cm~2+rhEGF 20U/cm~2)、G组(rhaFGF 60U/cm~2)、H组(hbFGF 60U/cm~2)和I组(等量生理盐水)共4组。②实验方法:造模后即开始用药,每隔两日按不同分组将试剂外用于创面。③实验评估:采用透明膜描记法记录造模后第3、7、10、14d创面愈合面积,计算出创面愈合率,记录创面愈合时间。分别比较A、B、E组,C、D、E组的创面愈合率和愈合时间。联合用药实验,在第3、7、14d取创面组织,分别用HE染色、免疫组织化学检测血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶-1(MMP-1),逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测VEGF mRNA的表达变化规律,观察不同时相点创面愈合情况。 结果:①创面愈合时间。A组创面平均愈合时间为(13.57±0.40)d,在第7、10、14d创面愈合率与E组比较,差异具有统计学意义(P0.05)。C组创面平均愈合时间为(14.01±0.25)d,在第7、10、14d创面愈合率与E组比较差异具有统计学意义(P0.05)。联合用药实验中,F组创面平均愈合时间为(13.33±0.12)d,与I组比较差异具有统计学意义(P0.05)。各个时相点,其创面愈合率与I组比较,差异具有统计学意义(P0.05)。②HE染色。造模后第3、7d,F和H组创面成纤维细胞(FB)、毛细血管生成较G、I组丰富。第14d,F组创面基本愈合,FB、毛细血管较其他对照组少;H组尚未完全愈合,其创面中FB增殖活跃,毛细血管数较多;G组组织学情况介于F、H组之间;各用药组的愈合情况优于I组。③MMP-1免疫组织化学。在造模后的第3d,各组已开始表达MMP-1,但无明显差异(P0.05)。第7d,各组MMP-1含量均达峰值。与I组相比较,F组差异显著具有统计学意义(P0.01),G、H组差异具有统计学意义(P0.05)。第14d,各组MMP-1量下降,F、G组显著少于I组且差异具有统计学意义(P0.05)。在各组之中,H组表达最多,但与I组相比不具统计学意义(P0.05)。④VEGF免疫组织化学。造模后第3d,各组VEGF蛋白表达未见明显差别(P0.05)。第7d,各组VEGF表达达高峰,与I组相比较,F组差异具有显著统计学意义(P0.01),G、H组差异具有统计学意义(P0.05)。第14d,各组VEGF下降。F组显著少于I组,差异具有统计学意义(P0.01)。G组少于I组,差异具有统计学意义(P0.05),H组表达在各组中最多但与I组相比差异无统计学意义。④VEGF mRNA RT-PCR结果。第3d,各组mRNA表达未见明显差异;第7d时,F、G组与I组比较差异具有显著统计学意义(P0.01),H组差异具有统计学意义显著(P0.05);第14d,各组表达均有下降,但F、G组与I组相比,差异具有统计学意义(P0.05),H组表达在各组中最多但与I组相比差异无统计学意义。 结论:①F组对兔耳创面愈合有促进作用,可促进创面肉芽组织生长、毛细血管形成与再上皮化形成。②其促进创面愈合机制可能是在早期通过上调VEGF mRNA的表达、增加创面中VEGF和MMP-1量。在晚期,下调VEGF mRNA的表达、降低创面中VEGF和MMP-1的含量,可能是其减少瘢痕形成的机制。③联合应用细胞因子(rhaFGF+rhEGF)优于单独用药。
[Abstract]:Objective: To observe the effect of recombinant human acidic fibroblast growth factor (rhaFGF) combined with recombinant human epidermal growth factor (rhEGF) on wound healing and to explore its possible mechanism.
Methods: Modeling and grouping: the establishment of New Zealand white rabbits rabbit full-thickness skin defect model, has carried out the concentration gradient test and combination experiment. In the experiment the concentration gradient in a rabbit ear model of full thickness skin defect were randomly divided into A group (rhaFGF 60U/cm~2), B group (rhaFGF 90U/cm~2). Group C (rhEGF 20U/cm~2), D group (rhEGF 40U/cm~2) and E group (normal saline) were divided into 5 groups according to the experimental results. The concentration gradient set combination experiment of reagent concentration. The combination model with experiment, were randomly divided into group F (rhaFGF 60U /cm~2+rhEGF 20U/cm~2), G group (rhaFGF 60U/cm~2). Group H (hbFGF 60U/cm~2) and I group (saline) group. A total of 4 experimental methods: model after the start of treatment, every two days by different groups of reagents for wounds. Results: the transparent membrane plethysmography recorded 3,7,10,14d after wound healing area, Calculate the wound healing rate, wound healing time was recorded. Compared to A, B, C, D, E group, E group wound healing rate and healing time. The combination experiment, take the wound tissue in 3,7,14d, respectively by HE staining, immunohistochemical detection of vascular endothelial growth factor (VEGF) and matrix metal protease -1 (MMP-1), reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) detection of mRNA VEGF expression changes, observed at different time points of wound healing.
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本文编号：1529621