尘螨变应原基因ProDer f1突变体的制备与表达

发布时间：2018-04-12 07:11

  本文选题：粉尘螨类变应原基因 + 基因改组　； 参考：《中国病原生物学杂志》2013年09期

【摘要】：目的制备粉尘螨1类变应原基因ProDer f 1的突变体并原核表达。方法 PCR扩增ProDer f 1基因,DNaseⅠ酶切后回收≤100bp的基因片段。回收的基因片段进行3轮无引物PCR,并以此为模板用ProDer f1基因的特异性引物进行PCR,切胶回收与ProDer f1基因大小相当的片段,连接pUCm-T载体后测序。DNAMAN软件分析突变基因,筛选理想的突变体,连接pET-28a(+)载体后转入E.coli BL21感受态细胞进行原核表达,切胶回收表达产物并进行Western blot验证。结果得到ProDer f1基因的突变体C1并成功表达嵌合蛋白,SDS-PAGE电泳分析该蛋白分子质量单位为35ku,与预期值相符;Western blot显示该嵌合蛋白能与粉尘螨变应原致敏兔血清中特异性抗体结合。结论成功制备ProDer f1基因的突变体且能在原核表达系统中表达嵌合蛋白。
[Abstract]:Objective to prepare the mutant and prokaryotic expression of class 1 allergen gene ProDer f 1 from Dermatophagoides farinae.Methods ProDer f 1 gene fragment 鈮，

本文编号：1738708