O型糖链合成阻滞对肠上皮细胞MUC2表达及细菌黏附的抑制作用

发布时间：2019-08-12 15:07

【摘要】：目的探讨肠上皮细胞O型糖链的合成阻滞对该细胞肠分化标记物MUC2表达及细菌黏附的影响。方法采用O型糖链抑制剂benzyl-α-GalNAc抑制结肠上皮细胞HT-29及其分化型细胞(HT-29-Gal)O型糖链的合成,经benzyl-α-GalNAc处理的HT-29和HT-29-Gal细胞分别命名为HT-29-OBN和HT-29-Gal-OBN。采用Real-time PCR和Western blotting方法检测上述4种细胞中MUC2基因的转录和蛋白表达水平,并将上述细胞与致病性大肠埃希菌(EPEC)和肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157:H7共培养,采用系列稀释菌落计数法观察细菌在上述细胞表面的黏附情况。结果 Realtime PCR和Western blotting结果显示,经benzyl-α-GalNAc处理后,HT-29和HT-29-Gal细胞MUC2的mRNA和蛋白表达均明显减少(P0.05)。HT-29-OBN和HT-29-Gal-OBN细胞与致病性大肠埃希菌EPEC和EHEC O157:H7的黏附明显少于HT-29和HT-29-Gal细胞(P0.05)。结论抑制肠上皮细胞O型糖链的合成可阻碍细菌黏附及MUC2的表达。
【图文】：

附数量少于HT-29-OBN细胞，提示分化程度高的细胞有阻碍细菌黏附的作用。HT-29-OBN和HT-29-Gal-OBN细胞的细菌黏附数量明显少于未经处理的HT-29和HT-29-Gal细胞，表明O型糖链的合成与细菌对肠上皮细胞的黏附有关。综上所述，我们认为O-glycans的合成参与了肠黏液屏障的形成，以及肠道病原体对肠黏膜上皮细胞的黏附过程。【参考文献】[1]GouletO,RuemmeleF,LacailleF,et al.Irreversibleintestinalfailure[J].JPediatrGastroenterolNutr,2004,38(3):250-269.[2]YangDZ,ZhouQQ,LiSZ,et al.Intestinalmucosalbarrier图1致病性大肠埃希菌(EPEC和EHECO157:H7)对肠上皮细胞的黏附能力检测Fig.1AdhesionofEPECandEHECO157:H7tointestinalepithelialcells(1)P<0.05;(2)P<0.01图2Real-timePCR检测细胞MUC2mRNA表达水平Fig.2MUC2mRNAexpressiondetectedbyreal-timePCR(1)P<0.053讨论肠黏液屏障是组成肠黏膜屏障的重要成分，肠道黏蛋白VNTR内的O-glycans含有丰富糖链，在肠道黏液层内是直接与肠道微生物、病毒、毒素相互作用的一线屏障，并直接成为后者结合、参与代谢、抑制细菌生长的靶点[12-13]。因此，研究黏蛋白分子上决定其生物学功能的O-glycans与病原微生物之间的相互作用，可更好地理解宿主与病原微生物之间的联系。本研究结果显示，相对于HT-29和HT-29-Gal细胞，HT-29-OBN和HT-29-Gal-OBN细胞中的MUC2mRNA和蛋白质表达水平均下降，考虑原因为MUC2转录、翻译过程中所涉及的酶、转录因子或图3Westernblotting检测细胞MUC2蛋白表达Fig.3MUC2proteinexpressiondetectedbyWesternblotting(1)P<0.05(1)(2)(2)(2)EHECO157:H7EPEC400350300250200150100500Adherentbac

胞，表明O型糖链的合成与细菌对肠上皮细胞的黏附有关。综上所述，我们认为O-glycans的合成参与了肠黏液屏障的形成，以及肠道病原体对肠黏膜上皮细胞的黏附过程。【参考文献】[1]GouletO,RuemmeleF,LacailleF,et al.Irreversibleintestinalfailure[J].JPediatrGastroenterolNutr,2004,38(3):250-269.[2]YangDZ,ZhouQQ,LiSZ,et al.Intestinalmucosalbarrier图1致病性大肠埃希菌(EPEC和EHECO157:H7)对肠上皮细胞的黏附能力检测Fig.1AdhesionofEPECandEHECO157:H7tointestinalepithelialcells(1)P<0.05;(2)P<0.01图2Real-timePCR检测细胞MUC2mRNA表达水平Fig.2MUC2mRNAexpressiondetectedbyreal-timePCR(1)P<0.053讨论肠黏液屏障是组成肠黏膜屏障的重要成分，肠道黏蛋白VNTR内的O-glycans含有丰富糖链，在肠道黏液层内是直接与肠道微生物、病毒、毒素相互作用的一线屏障，并直接成为后者结合、参与代谢、抑制细菌生长的靶点[12-13]。因此，研究黏蛋白分子上决定其生物学功能的O-glycans与病原微生物之间的相互作用，，可更好地理解宿主与病原微生物之间的联系。本研究结果显示，相对于HT-29和HT-29-Gal细胞，HT-29-OBN和HT-29-Gal-OBN细胞中的MUC2mRNA和蛋白质表达水平均下降，考虑原因为MUC2转录、翻译过程中所涉及的酶、转录因子或图3Westernblotting检测细胞MUC2蛋白表达Fig.3MUC2proteinexpressiondetectedbyWesternblotting(1)P<0.05(1)(2)(2)(2)EHECO157:H7EPEC400350300250200150100500Adherentbacteria(cfu/wel)HT-29-GalHT-29HT-29-Gal-OBNHT-29-OBN2.42.22.01.81.61.41.21.00.80.60.40.20MUC
【作者单位】： 第三军医大学西南医院全军消化病研究所;
【基金】：国家自然科学基金(81170340)~~
【分类号】：R363

【参考文献】

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【共引文献】

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本文编号：2525788