新型重组乳酸杆菌递送系统的构建及其在金葡菌黏膜疫苗中的应用

发布时间：2020-03-22 08:48

【摘要】：乳酸杆菌(Lactobacillus)是一种革兰氏阳性菌,被广泛应用于食品、药品等工业。乳酸杆菌不仅安全无毒,还具有多种益生效果,也被证明可以作为活菌载体递送抗原。由于乳酸杆菌种类较多,且生化生理特性、分子构成及免疫特性均不同,种间转录和翻译的差异也很大,因此其递呈抗原的能力不同,不同菌株对同一抗原的表达水平和表达产物不同,对动物产生的抗体水平以及刺激淋巴细胞表达不同细胞因子也有差别。虽然乳酸杆菌作为活菌载体有诸多优点,但是其基因工程发展较慢,其作为受体菌依旧有许多难题需要攻克。金黄色葡萄球菌(S.aureus)是一种分布广泛的人畜共患病原菌,能引发菌血症、感染性心内膜炎等多种疾病。近年来,由于抗生素的滥用,耐药菌株逐年增加,呈现多重耐药趋势,这导致S.aureus的预防和治疗难度增大。目前,尚无有效的S.aureus疫苗问世。S.aureus通过黏膜感染机体,且尚未有关于S.aureus黏膜疫苗的报道。在本研究中,首先从本实验室的菌库中筛选获得3株野生型乳杆菌作为受体菌株,分别是开菲尔乳杆菌SXJ29、干酪乳杆菌SXJ30、植物乳杆菌WXD234。以egfp作为报告基因,构建了不同的重组乳酸杆菌SXJ29/SXJ30/WXD234(pNZ8148-egfp),通过Western blot和激光共聚焦检测,证明外源基因egfp可以在3株野生型乳酸杆菌成功表达。3株重组乳酸杆菌与野生菌株相比,生理特性无明显变化,依旧有耐酸耐胆盐特性,外源质粒也能稳定遗传。证明了基于开菲尔乳杆菌SXJ29、干酪乳杆菌SXJ30和植物乳杆菌WXD234为载体的乳酸杆菌递送系统的可行性。该乳酸杆菌递送系统能成功表达S.aureus抗原铁-异羟肟酸摄取蛋白D2(FhuD2)和无毒突变的ɑ-溶血素(Hla _(H35L))。以重组乳酸菌口服免疫小鼠后,在S.aureus引发的肺炎感染模型中能为小鼠提供不同程度的保护。其中免疫重组菌WXD234(pNZ8148-hla_(H35L))的保护效果最好,该重组菌能在S.aureus引发的肺炎模型中提高小鼠的存活率,一定程度缓解肺部感染程度,减少S.aureus在肺部的定植。本研究建立了基于开菲尔乳杆菌SXJ29、干酪乳杆菌SXJ30和植物乳杆菌WXD234为载体的乳酸杆菌表达系统,该表达系统能递送S.aureus抗原并对S.aureus肺部感染提供一定的免疫保护效果,为乳酸杆菌表达外源抗原以及S.aureus黏膜疫苗的开发提供了新思路和理论指导。
【图文】：

同时也导致了免疫反应的有效性（见图1.1）[22]。因此尽管口服免疫可以在小肠、升结肠、乳腺和唾液腺中诱导产生大量抗体，但在大肠、扁桃体或女性生殖道黏膜诱导产生 IgA 抗体的效率相对较低[23-25]。相反，直肠免疫在直肠能引发强烈的局部免疫反应，，但在小肠和近端结肠几乎没有反应[24-26]。人的鼻腔或扁桃体免疫可导致上呼吸道黏膜和局部分泌物（唾液、鼻腔分泌物）产生抗体，但不会引起肠道的免疫反应[27, 28]。

egfp片段的PCR结果
【学位授予单位】：内蒙古大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R392-33

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本文编号：2594820