调节性B细胞与抗体诱导的移植耐受的相关性研究

发布时间：2020-05-05 20:06

【摘要】：调节性免疫细胞网络是目前移植免疫领域研究热点内容之一,其中调节性B细胞(Regulatory B cells,Bregs)是新近发现的一群具有负向调节功能的B细胞,该类细胞可通过多种作用方式从而促进器官移植术后免疫耐受形成,以及维持耐受状态。Bregs的发现及作用机制的研究,为诱导移植耐受策略提供了新方向。但是目前对于Bregs细胞的表型、功能、及调节机制没有深入的认识,尤其在移植免疫中Bregs细胞发挥的作用至今尚未明确。在已有报道的基础上,我们进行了以下研究。首先,我们建立了同种异基因小鼠胰岛移植动物模型,按以下方式分组:对照组(n=5);单纯移植1周组(n=5);移植+双抗体1周组(n=5);单纯移植2周组(n=5);移植+双抗体2周组(n=5);长期耐受组(即移植物存活超过90天)(n=4)。流式细胞仪检测移植后受体小鼠脾细胞中CD19+CD5+CD1d+B10细胞和CD19+Tim-1+B细胞比例。结果表示,只有移植+双抗体2周组小鼠体内的B10细胞有明显增加,最高增加至5.9%(P0.05)。单纯移植2周组、移植+双抗体2周组,以及长期耐受组小鼠体内的CD19+Tim-1+B细胞则均有明显增加(P0.05)。为进一步明确Bregs是通过与哪些免疫细胞作用而促进耐受形成,我们同期检测了CD4+CD25+Tregs以及CD4+IFN-γ+Th1细胞和CD4+IL-4+Th2细胞。结果表明,移植+双抗体2周组小鼠体内的CD4+CD25+Tregs和CD4+IL-4+Th2均有显著增加(P0.05),CD4+IFN-γ+Th1细胞则明显减少(P0.05)。并且,除Th2细胞外,长期耐受小鼠的各淋巴细胞比例变化趋势都与术后2周数据一致。以上结果提示在抗CD45RB/抗Tim-1联合诱导的小鼠移植耐受过程中,调节性B细胞在耐受的初期及维持过程中都起到了重要作用,其具体机制可能是通过与调节性T细胞,Th1细胞以及Th2细胞的相互作用参与免疫调节。之后,我们对调节性B细胞的扩增条件进行了初步探索。结果表明LPS可刺激B10细胞在体外进行增殖,LPS的作用时间(72h)与细胞的增殖成正相关(P0.05)。
【图文】：

对比图,胰腺,对比图,胶原酶

配制胶原酶 P 150mg/100ml 的浓度，称取适量胶原酶 P 粉末，溶于 HBSS 缓冲冰上备用。摘取胰腺用 1%浓度的戊巴比妥钠溶液，按 0.3ml/30g 小鼠体重的剂量，麻将麻醉后的小鼠固定于操作台上；碘伏消毒手术区域；开腹并打开胸腔，剪破心脏放血；暴露胆总管，用止血钳夹闭十二指肠乳头处；用连接 30G 针头的 2.5ml 注射器行胆总管逆行灌注，将 2.5ml 的注到胰腺组织，，充盈前后胰腺对比如图 2-1：

胰腺,离心管,胰岛细胞,移液管

组织与酶溶液的 50ml 离心管，置于 37℃水轻震荡摇匀 3 到 4 次；后，用力快速摇匀约 20 秒；后胰腺的离心管加入配制好的中止液，加满菌烧杯上，过滤中止消化后的胰腺；胞胰岛细胞分装于 50ml 离心管中，1200r 离心清液，用移液器接 10ml 移液管，将剩余部图 2-2 完整取出的胰腺
【学位授予单位】：电子科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R392

【参考文献】