靶向树突状细胞的卵清蛋白纳米疫苗诱导免疫耐受的研究及特应性皮炎皮肤、口腔、肠道菌群特征研究

发布时间：2020-05-05 22:27

【摘要】：第一部分:靶向树突状细胞的卵清蛋白纳米疫苗诱导免疫耐受的研究特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)是一种慢性复发性炎症性疾病,发病机制中针对过敏原的Th2型为主的免疫反应起重要作用。传统药物治疗均不能防止复发。过敏原特异性免疫治疗(Allergen specific immunotherapy,AIT)是目前针对病因治疗的唯一有效的办法。聚乳酸-羟基乙酸共聚物(poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA)纳米小球是疫苗载药系统的研究热点,是综合解决缓慢持续释放、提高靶向性及生物利用度的良好方案。本研究制备了荷载过敏原卵清蛋白(OVA)的PLGA纳米小球,并利用甘露聚糖(Mannan)修饰纳米小球,通过靶向树突状细胞(dendritic cells,DCs),提高其摄取效率,进而诱导T细胞的极化以达到过敏原特异性免疫治疗的目的。首先,我们利用复乳剂-溶液挥发法制备荷载OVA的PLGA纳米小球,采用吸附的方式将Mannan修饰在纳米小球表面,扫描电镜检测制备的纳米小球形状圆润规整,Zeta电位及激光粒度分析仪检测纳米小球粒径均在250nm-300nm之间,荷载了过敏原的纳米小球表面Zeta电势绝对值在20-30mv之间,粒径分布较为均匀一致,BCA蛋白测定法测定OVA包封率为69.5%±4.1%,并可在体外缓慢持续释放,CCK-8方法检测PLGA纳米小球细胞毒性较低。然后,将荷载OVA的PLGA-OVA纳米小球和PLGA-OVA-Mannan小球与外周血诱导的DCs(MoDCs)共孵育24小时,DCs表面CD80、CD86及CD83、HLA-DR的表达不同程度下降;细胞分泌促炎性细胞因子IL-6、TNF-α水平较阴性对照升高,但较游离OVA溶液刺激组显著降低,IL-10水平较阴性对照及OVA溶液组水平显著升高,实验结果提示荷载OVA的PLGA纳米小球可以降低DCs活化水平,诱导DCs向半成熟或未成熟方向发展。最后,将与纳米小球刺激过的DCs与自体来源初始T细胞体外共培养6天,流式检测T细胞的极化方向,结果显示与OVA溶液刺激组相比,分泌IL-4的Th2细胞亚群比例明显降低,分泌IL-22、IL-17、IFN-γ的Th22、Th17、Th1细胞亚群比例呈下降趋势,表达FoxP3的Treg细胞比例显著升高,提示纳米小球可抑制T细胞向Th2方向极化,诱导T细胞向Treg方向极化,参与诱导免疫耐受。以上实验结果表明,荷载抗原的纳米小球在体外可抑制DCs向成熟方向发展,进而诱导T细胞向Treg方向分化,诱导免疫耐受,有望成为新型的靶向DCs的过敏原疫苗,期望对过敏原特异性免疫治疗提供新思路。第二部分:特应性皮炎患者皮肤、口腔、肠道菌群特征及相关性研究关于AD患者皮肤和肠道菌群特征曾经有研究分别单独描述过;然而,从未有研究描述过AD患者口腔菌群特征,来自AD患者的不同部位菌群间的联系也尚不清楚。本研究分析、比较了 AD患者皮肤、口腔、肠道三部位菌群的结构及功能。选取172名AD患者及120名健康对照者,收集皮肤、口腔和肠道标本,通过16sRNA基因扩增子测序获得三部位菌群信息,同时收集临床信息。我们将测序结果汇总分析发现AD患者皮肤及口腔菌群多样性有不同程度的下降,下降程度和疾病严重性呈正相关,肠道菌群多样性未见明显下降。AD患者在不同部位的菌群结构与对照相比都有差异,这种差异在不同部位之间互不相同,而且AD患者皮肤和口腔菌群距离比健康对照更近。AD患者不同部位菌群有着部位特异性的改变,在AD中许多口腔特异性菌种在皮肤和口腔的富集方向是相反的。而且,AD患者皮肤及口腔菌群功能通路呈负相关性。以上结果表明,AD患者皮肤、口腔及肠道三部位菌群结构和功能有部位特异性的改变。AD患者口腔菌群和皮肤菌群有着密切联系,可能对皮肤炎症起调控作用。
【图文】：

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北京协和医学院、中国医学科学院博士论文．５统计学分析逡逑验数据以均数±标准差表示。计量资料独立多组间均数差异比因素ＡＮＯＶＡ检验方法。统计结果用Ｇｒａｐｈｐａｄ邋ｐｒｉｓｍ作图。逡逑．实验结果逡逑．１邋ＰＬＧＡ纳米小球粒径大小测定逡逑．１．１空白ＰＬＧＡ纳米小球：Ｚｅｔａ电位及激光粒度分析仪测量结为（２６７．３±１．１）邋ｎｍ，ＰＤＩ为０．００６±０．００２逡逑１００－１邋，逦５「１００逡逑
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R392

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本文编号：2650826