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CDK5对小鼠黑素瘤细胞B16迁移和酪氨酸酶活性的影响

发布时间:2020-05-12 22:39
【摘要】:黑素瘤是一种最具侵袭性的、发生于皮肤的恶性癌症,具有致死率高、治愈后易复发的特点,在细胞生物学中,抑制细胞的增殖、分化和迁移等过程对黑素瘤的控制和治疗具有重要的意义。已有研究发现细胞周期素依赖蛋白激酶5(Cyclin-dependent Kinase5,CDK5)在B16黑素瘤细胞中高表达,CDK5-knockdown可导致细胞的凋亡和死亡,但CDK5-knockdown对黑素瘤细胞的迁移以及酪氨酸酶的活性影响未见报道。本研究通过细胞转染的方法研究CDK5-knockdown对小鼠B16黑素瘤细胞迁移的影响以及酪氨酸酶活性进行研究,通过对实时荧光定量聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)的数据分析和Western印迹结果的比对发现在小鼠B16黑素瘤细胞中CDK5的敲减可抑制Integrin-Betal,Integrin-Beta5和血小板衍生生长因子-B(Platelet derived growth factor-B.PDGF-B)在转录和翻译水平的表达;细胞划痕试验表明在小鼠B16黑素瘤细胞中CDK5的敲减表达可抑制B16黑素瘤细胞的迁移;酪氨酸酶活性检测结果表明小鼠B16黑素瘤细胞中CDK5的敲减表达对B16细胞中酪氨酸酶活性起到了抑制作用。本试验结果揭示敲减CDK5通过调控Integrin-Betal、Integrin-Beta5和PDGF-B的表达而对小鼠B16黑素瘤细胞的迁移起抑制作用,并对B16黑素瘤细胞中酪氨酸酶活性起调控作用。
【图文】:

水平表,表达水平,蛋白


B16转染CDK5-kn0Ckdown质粒后,荧光定量PCR和免疫印迹结果发现,与对照逡逑组相比,CDK5蛋白水平和mRNA水平的表达量明显低于对照组表达量,即分别下降逡逑了邋45%和65%,且差异极显著(图2.2)邋(P<0.01)逡逑A逦B逡逑!|逡逑II邋^逦HHHHI逡逑II.邋■逦一逡逑00.邋一HPI逦WIUHype邋(DK5邋knockdown逡逑WM邋l>p*逦CDK9邋kiMwItihna邋■逡逑c逡逑1邋5-1逡逑]f邋逦逡逑^lijL逡逑?Hrf邋(V{M逦CDK9邋fciHMiMlM*邋?逡逑图2.2邋CDK5-knockdown在蛋白和mRNA水平表达量逡逑注:A:CDK5mRNA表达水平逡逑注:B:CDK5蛋白表达水平逡逑注:C:CDK5蛋白灰度分析表达水平逡逑2.3实时q捁舛浚校茫液偷鞍妆泶锝峁义嫌耄危米橄啾龋茫模耍担耄睿铮悖耄洌铮鳎詈螅校模牵疲碌模恚遥危帘泶锪肯陆盗隋澹玻担ィ义义喜钜煜灾ǎ校迹埃埃担╁澹诲澹桑睿簦澹纾颍椋睿拢澹簦幔旎蛟冢茫模耍担耄睿铮悖耄洌铮鳎钭榈模恚遥危帘泶锪肯陆靛义希玻玻ィ桑睿簦澹纾颍椋睿拢澹簦幔靛逑陆盗隋澹矗担ィ也钜旒灾ǎ校迹埃埃保#校模牵疲隆ⅲ桑睿簦澹纾颍椋睿拢澹簦幔戾义希保梗义

本文编号:2660939

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