CDK5对小鼠黑素瘤细胞B16迁移和酪氨酸酶活性的影响
发布时间:2020-05-12 22:39
【摘要】:黑素瘤是一种最具侵袭性的、发生于皮肤的恶性癌症,具有致死率高、治愈后易复发的特点,在细胞生物学中,抑制细胞的增殖、分化和迁移等过程对黑素瘤的控制和治疗具有重要的意义。已有研究发现细胞周期素依赖蛋白激酶5(Cyclin-dependent Kinase5,CDK5)在B16黑素瘤细胞中高表达,CDK5-knockdown可导致细胞的凋亡和死亡,但CDK5-knockdown对黑素瘤细胞的迁移以及酪氨酸酶的活性影响未见报道。本研究通过细胞转染的方法研究CDK5-knockdown对小鼠B16黑素瘤细胞迁移的影响以及酪氨酸酶活性进行研究,通过对实时荧光定量聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)的数据分析和Western印迹结果的比对发现在小鼠B16黑素瘤细胞中CDK5的敲减可抑制Integrin-Betal,Integrin-Beta5和血小板衍生生长因子-B(Platelet derived growth factor-B.PDGF-B)在转录和翻译水平的表达;细胞划痕试验表明在小鼠B16黑素瘤细胞中CDK5的敲减表达可抑制B16黑素瘤细胞的迁移;酪氨酸酶活性检测结果表明小鼠B16黑素瘤细胞中CDK5的敲减表达对B16细胞中酪氨酸酶活性起到了抑制作用。本试验结果揭示敲减CDK5通过调控Integrin-Betal、Integrin-Beta5和PDGF-B的表达而对小鼠B16黑素瘤细胞的迁移起抑制作用,并对B16黑素瘤细胞中酪氨酸酶活性起调控作用。
【图文】:
B16转染CDK5-kn0Ckdown质粒后,荧光定量PCR和免疫印迹结果发现,与对照逡逑组相比,CDK5蛋白水平和mRNA水平的表达量明显低于对照组表达量,即分别下降逡逑了邋45%和65%,且差异极显著(图2.2)邋(P<0.01)逡逑A逦B逡逑!|逡逑II邋^逦HHHHI逡逑II.邋■逦一逡逑00.邋一HPI逦WIUHype邋(DK5邋knockdown逡逑WM邋l>p*逦CDK9邋kiMwItihna邋■逡逑c逡逑1邋5-1逡逑]f邋逦逡逑^lijL逡逑?Hrf邋(V{M逦CDK9邋fciHMiMlM*邋?逡逑图2.2邋CDK5-knockdown在蛋白和mRNA水平表达量逡逑注:A:CDK5mRNA表达水平逡逑注:B:CDK5蛋白表达水平逡逑注:C:CDK5蛋白灰度分析表达水平逡逑2.3实时q捁舛浚校茫液偷鞍妆泶锝峁义嫌耄危米橄啾龋茫模耍担耄睿铮悖耄洌铮鳎詈螅校模牵疲碌模恚遥危帘泶锪肯陆盗隋澹玻担ィ义义喜钜煜灾ǎ校迹埃埃担╁澹诲澹桑睿簦澹纾颍椋睿拢澹簦幔旎蛟冢茫模耍担耄睿铮悖耄洌铮鳎钭榈模恚遥危帘泶锪肯陆靛义希玻玻ィ桑睿簦澹纾颍椋睿拢澹簦幔靛逑陆盗隋澹矗担ィ也钜旒灾ǎ校迹埃埃保#校模牵疲隆ⅲ桑睿簦澹纾颍椋睿拢澹簦幔戾义希保梗义
本文编号:2660939
【图文】:
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