线粒体亮氨酰-tRNA合成酶失调在肾透明细胞癌中的作用及其机制研究

发布时间：2020-05-14 21:36

【摘要】：肾细胞癌(renal cell cancer,RCC),简称肾癌,是起源于肾实质小管上皮细胞的恶性占位性疾病,其中80～85%为透明细胞癌(clear cell RCC,ccRCC)。目前,对RCC发生、发展和转移的分子机制仍未完全认识,亟需进一步的研究。本课题组前期采用全基因组测序的方法检测了 ccRCC组织和配对的癌旁肾脏组织的基因序列,并比较了两组间的差异基因,从而发现大多数ccRCC组织中线粒体亮氨酰-tRNA 合成酶(mitochondrial leucyl-tRNA synthetase,LARS2)基因缺失或发生了突变,导致其功能丧失。这提示LARS2可能在ccRCC的发生、发展中发挥重要的作用。目的:研究LARS2在ccRCC中的表达水平,LARS2对ccRCC生物学行为的影响及其发挥作用的机制。材料和方法:(I)采用qRT-PCR、Western blot和ICC的方法检测了 ccRCC细胞株和肾小管上皮细胞株中LARS2基因的RNA和蛋白质表达水平;还采用qRT-PCR、Western blot和IHC的方法检测了 ccRCC组织和对应的癌旁肾脏组织中LARS2基因的RNA和蛋白质表达水平。此外,研究了 ccRCC组织中LARS2的表达水平与患者临床病理特征的关系,并分析了 LARS2对ccRCC患者预后的影响。(2)在ccRCC细胞株OS-RC-2、Caki-1和肾小管上皮细胞株HKC中建立了 LARS2过表达的稳转细胞和对照细胞;在HKC细胞株中建立了 LARS2低表达的稳转细胞和对照细胞。随后检测了它们的增殖情况、形成克隆的能力、周期、凋亡水平、ATP含量、活性氧水平,以及OS-RC-2细胞在免疫缺陷小鼠肾脏上长出肿瘤的能力,并将稳转细胞与对照细胞的检测结果相比较。(3)用 Western blot 法检测了 LARS2 过表达的 OS-RC-2、Caki-1、HKC 细胞,LARS2低表达的HKC细胞和对照细胞中Ras/Raf/MEK/ERK、AMPKα、HIF-1α/mTOR和VHL/HIF-2α通路的激活水平,并将稳转细胞与对照细胞的检测结果相比较。结果:(1)与肾小管上皮细胞相比,ccRCC细胞中LARS2mRNA和蛋白质的表达水平降低;与癌旁肾脏组织相比,ccRCC组织中LARS2mRNA和蛋白质的表达水平显著降低(P0.05)。LARS2mRNA的表达水平与ccRCC患者的临床病理特征相关,并且能影响ccRCC患者的预后,LARS2低表达的患者预后更差(P0.05)。(2)与对照细胞相比,LARS2过表达细胞增殖减慢,形成克隆能力减弱,细胞周期存在G1/S期阻滞,凋亡增加,ATP含量增多,活性氧水平降低,形成肾脏肿瘤的能力减弱(均P0.05)。与对照细胞相比,LARS2低表达细胞增殖加快,形成克隆能力增强,ATP含量减少,活性氧水平升高(均P0.05)。(3)与对照细胞相比,LARS2过表达细胞中Ras/Raf/MEK/ERK通路、AMPKα通路和mTOR通路的活性被抑制(均P0.05),VHL/HIF-2α通路的活性无明显变化(P0.05)。与对照细胞相比,LARS2低表达细胞中Ras/Raf/MEK/ERK通路、AMPKα通路、mTOR通路被激活(均P0.05),VHL/HIF-2α通路的活性无明显变化(P0.05)。结论:本研究发现了 LARS2在ccRCC组织和细胞中的表达水平显著降低,LARS2的表达水平与ccRCC患者的临床病理特征相关并且是影响ccRCC预后的危险因素。LARS2在ccRCC中发挥抑癌性作用,敲低LARS2会导致ccRCC细胞的恶性程度增强。LARS2功能缺失在ccRCC中发挥的作用与Ras/Raf/MEK/ERK、AMPKα通路、mTOR通路被激活有关,而与VHL/HIF-2α通路无明显的关联。
【图文】：

，相色谱仪测定ＴＨ－３０２药物的含量。逡逑①微球包封率及载药量计算的公式如下所示：逡逑载药量＝（含药量＋微球总重）Ｘ邋１００％逡逑包封率＝（实际载药量＋理论载药量）Ｘ邋１００％逡逑②线性与范围的建立：逡逑精密称取２５ｍｇＴＨ－３０２原液，溶于５ｍｌ体积比为１：９的甲醇和二氯甲烷的混合剂，，超声使其完全溶解，母液配置完成。母液含量测定测定波长的选择：空白辅料主药ＴＨ－３０２进行紫外全波长扫描，确定ＴＨ－３０２最大吸收波长为３１６ｎｍ。移液管精移取母液邋０．１ｍｌ、０．２ｍｌ、０．４ｍｌ、０．６ｍｌ、０．８ｍｌ、１．２ｍｌ邋并定容至邋１０ｍｌ，配制浓度为邋５ｕｇ／ｍｌ１０ｕｇ／ｍｌ、２０ｕｇ／ｍｌ、３０ｕｇ／ｍｌ、４０ｕｇ／ｍｌ、５０ｕｇ／ｍｌ邋的一系歹ｉｊ样品溶液，ＨＰＬＣ邋法进行外吸光度测定，测定波长为３１６ｎｍ，并以ＴＨ－３０２浓度（Ｘ）为横坐标，吸光值（Ｙ）纵坐标绘制标准曲线。标曲测定结果如图１－１所示：逡逑１．２逡逑

进样量：１０邋ｕ邋１。逡逑按上述色谱条件进行分析，以峰面积（Ｙ）为纵坐标，ＴＨ－３０２药物浓度（Ｘ）为横坐逡逑标，绘制标准曲线，如图１－２所示：逡逑１２０．００邋．逡逑１００．００逡逑８０．００邋；逡逑＜６０．００邋：邋＾逡逑４０．００逦Ｉ—邋逦－逦逡逑２０．００逦：逡逑Ｑ邋Ｑ０逦逦邋逦逡逑０．００逦２．００逦４．００逦６．００逦８．００逦１０．００逦１２．００逡逑浓度（ｕｇ／ｍｌ）逡逑图１－２邋ＴＨ－３０２药物浓度与微球释放度的关系逡逑１３逡逑
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.11

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 郑丹琴;刘志磊;朱松杰;吕锦晶;章文韵;邓海腾;周韧;;过氧化物还原酶3参与肾透明细胞癌发生与发展的分子机制[J];中山大学学报(医学版);2019年02期

2 杨建;刘建和;李沛;王光;杨童欣;石鑫;;早期肾透明细胞癌的高风险因素及预后分析[J];现代泌尿生殖肿瘤杂志;2019年02期

3 徐辉景;张梅花;余德洪;冯耀霞;;多层螺旋CT检查诊断肾透明细胞癌病理对比分析[J];浙江中西医结合杂志;2017年12期

4 孙连桃;肖伟利;;巨噬细胞移动抑制因子在肾透明细胞癌组织中的表达与意义[J];中国老年学杂志;2017年24期

5 潘险峰;;内皮细胞特异性分子水平与肾透明细胞癌发生及恶性程度的相关性[J];实用癌症杂志;2018年02期

6 陈文峰;;后腹腔镜肾癌根治术治疗局限性肾透明细胞癌的临床疗效[J];中国医药指南;2015年31期

7 夏韩;哈木拉提·吐送;王文光;王玉杰;张立东;;汉族、维吾尔族肾透明细胞癌患者血清差异氨基酸的比较[J];现代泌尿外科杂志;2015年11期

8 兰英;刘燕娜;曲国田;陈晓慧;;结节性硬化症合并肾透明细胞癌的超声表现及文献复习[J];东南国防医药;2015年02期

9 霍英杰;袁静;王成健;张玉;赵永强;姚文娟;杨景震;;低级别肾透明细胞癌的3.0TMRI研究[J];临床放射学杂志;2014年02期

10 张勇;;肾透明细胞癌影像学表现与病理学改变的相关性[J];菏泽医学专科学校学报;2013年04期

相关会议论文 前10条

1 桂定文;张青汉;;肾透明细胞癌头皮转移一例报告[A];第七次中国中西医结合泌尿外科学术年会暨第二次广东省中西医结合泌尿外科学术年会论文集[C];2009年

2 刘婧;;肾透明细胞癌伴全身转移在全身扩散加权成像的影像规律[A];中华医学会第16次全国放射学学术大会论文汇编[C];2009年

3 吴俊;梅长林;赵海丹;戴兵;刘亚伟;;多囊蛋白-1在肾透明细胞癌及常染色体显性多囊肾病患者体液中含量的比较研究[A];中华医学会肾脏病学分会2006年学术年会论文集[C];2006年

4 柏瑞;欧陕兴;林伟光;;双肾透明细胞癌胰腺转移一例报告[A];中华医学会第十三届全国放射学大会论文汇编（下册）[C];2006年

5 何还珠;;肾透明细胞癌的1例报道[A];2003年全国医学影像技术学术会议论文汇编[C];2003年

6 毕伟;徐丽伟;徐春媚;董晓秋;;肾透明细胞癌超声造影模式及定量指标分析[A];中国超声医学工程学会第七届全国腹部超声学术会议学术论文汇编[C];2007年

7 徐丽伟;徐春媚;毕伟;董晓秋;;肾透明细胞癌超声造影模式与其病理分化程度的相关性[A];中国超声医学工程学会第七届全国腹部超声学术会议学术论文汇编[C];2007年

8 郑宇朋;;肾透明细胞癌三次转移至鼻腔[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年

9 耿江;方祖军;吴忠;姜昊文;郑捷;丁强;;肾透明细胞癌术后远处转移(附15例报告)[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年

10 田野;;肾透明细胞癌组织中COX-2的表达与淋巴管生成关系的研究[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年

相关重要报纸文章 前3条

1 张中桥;Survivin在肾透明细胞癌中起重要作用[N];中国医药报;2006年

2 王茜;隐瞒病情可能更会吓坏患者,好心态是良药[N];新华每日电讯;2007年

3 本报记者 谭嘉;别把PET—CT当体检“神器”[N];健康报;2013年

相关博士学位论文 前10条

1 王燕飞;遗传性耳聋基因的鉴定与斑马鱼模型构建及功能研究[D];中国人民解放军医学院;2018年

2 林雯;CNTF基因修饰的骨髓间充质干细胞对蓝光损伤视网膜的保护研究[D];福建医科大学;2018年

3 孙雅玲;COMMD10基因在小鼠和人体组织中的表达与分布及生物信息挖掘[D];南方医科大学;2018年

4 臧元伟;eIF3b在肾透明细胞癌中预后价值和生物学作用的研究[D];山东大学;2018年

5 穆中一;LncRNA AFAP1-AS1通过抑制PTEN-AKT信号通路诱导肾透明细胞癌生长和转移[D];中国医科大学;2018年

6 肖文;PGC1A/UCP1介导的脂质棕色化在肾透明细胞癌中作用以及机制研究[D];华中科技大学;2018年

7 杨帆;miR-543通过靶向KLF6调控肾透明细胞癌细胞增殖和侵袭的机制研究[D];中国人民解放军空军军医大学;2018年

8 王明磊;AHNAK2作为肾透明细胞癌的新型预后标志物及重要致癌蛋白的研究[D];上海交通大学;2017年

9 王延东;MiR-455-3p.1靶向调控PIK3R1基因促进肾透明细胞癌细胞增殖、侵袭与转移的研究[D];贵州医科大学;2018年

10 陈奇伟;应用力学模型研究肾透明细胞癌微环境中淋巴细胞与肿瘤生长介导的压力对肿瘤细胞作用的分子机制[D];大连医科大学;2018年

相关硕士学位论文 前10条

1 刘渊;基于基因表达与DNA甲基化特征预测肾透明细胞癌患者的生存率[D];内蒙古大学;2019年

2 陈晨羲;外泌体介导的miR-9-5p抑制肾癌细胞增殖和转移及其相关机制的探索[D];福建医科大学;2018年

3 吴琳;SORD在肾透明细胞癌组织中的表达及对786-O细胞增殖、迁移能力的影响[D];福建医科大学;2018年

4 彭程;MIR155HG在肾透明细胞癌中的表达水平及对肿瘤生物学行为的影响[D];中国人民解放军医学院;2018年

5 聂文远;MiRNA-122在肾透明细胞癌中的作用和机制研究[D];中国人民解放军医学院;2018年

6 陈梦林;基于CT影像组学及传统影像学对肾脏肿瘤病理类型诊断的初步研究[D];南方医科大学;2019年

7 宋进;肾透明细胞癌患者血清低维生素D状态与肾IL-6/STAT3信号过度活化的相关性[D];安徽医科大学;2019年

8 陈展;ABAT基因在肾透明细胞癌中的表达及其对肾癌细胞增殖、迁移、代谢的影响[D];厦门大学;2018年

9 崔强;NEDD4L在肾透明细胞癌中的表达及作用研究[D];厦门大学;2018年

10 徐明彬;术前外周血淋巴细胞与单核细胞比值和白蛋白在肾透明细胞癌预后评估中的价值[D];广西医科大学;2019年

本文编号：2663970