EPOR在rh-EPO通过ERK信号通路促早产儿脑白质损伤模型鼠脑血管生成中的作用研究

发布时间：2020-05-23 00:10

【摘要】：目的:通过3日龄新生SD大鼠建立未成熟大鼠缺氧缺血脑损伤模型,观察脑组织内EPOR被阻断后,重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rh-EPO)对分裂原活化抑制剂/细胞外信号调节激酶(mitogen-activatedprotein kinase/extracellular signal-regulated kinase,MEK/ERK)信号通路的影响,一定程度上阐明EPOR在rh-EPO通过ERK信号通路促早产儿脑白质损伤模型鼠脑血管生成中的上游关键作用。方法:本实验采用合笼分娩后选取新生3日龄清洁级新生SD大鼠,采用随机数余分组法分为假手术组(Sham)、缺血缺氧血组(hypoxia-ischemia,HI)、缺血缺氧+EPO组、缺血缺氧+EPOR拮抗剂组(ab193235),缺血缺氧+EPO+EPOR拮抗剂组,建立脑室周围白质损伤(Periventricular white matter damage,PWMD)动物模型。分组处理后60分钟,90分钟,每组取不少于6只,异氟烷吸入麻醉后断头取脑,游离出大鼠右侧大脑半球,免疫印迹(Western Blot)法检测总促红细胞生成素受体(erythropoietin receptor,EPOR)、磷酸化促红细胞生成素受体(phosphorylated erythropoietin receptor,p-EPOR)、总细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinas)及磷酸化的细胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated kinas,p-ERK)蛋白。分组处理后2d、4d,每组取不少于6只,游离出幼鼠右侧大脑半球,Western Blot法检测白细胞分化抗原34(cluster of differentiation34,CD34)、血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor2,VEGFR2)蛋白。实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real time-polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、血管生成素1(angiopoietin-1,Ang-1)。结果:分组处理完成后60和90分钟,仔鼠脑组织EPOR蛋白表达在假手术组呈较低水平;在缺血缺氧组、缺血缺氧+EPO组和缺血缺氧+EPO+EPOR拮抗剂组表达增加,高于假手术组;在缺血缺氧+EPO组高于缺血缺氧组和缺血缺氧+EPO+EPOR拮抗剂组;在缺血缺氧+EPOR拮抗剂组低于缺血缺氧组;差异均有统计学意义(F值分别为30.154和20.265,P值均0.05)。p-EPOR和p-ERK,以及分组处理完成后2和4天VEGFR2、CD34蛋白,在各组的表达差异与EPOR一致,差异均有统计学意义(P值均0.05);且分组处理完成后4天,VEGFR2表达在缺血缺氧+EPO+EPOR拮抗剂组低于缺血缺氧组(P0.05)。完成分组处理后60和90分钟,各组仔鼠脑组织ERK表达差异均无统计学意义(F值分别为1.117和0.734,P值均0.05)。VEGF mRNA,分组处理后2天,HI组与Sham组,HI+EPOR拮抗剂组与HI组,HI+rh-EPO组与各组,HI+EPOR拮抗剂+rh-EPO组与HI+EPOR拮抗剂组间,有统计学差异(P0.01);分组处理后4天,HI组与Sham组,HI+EPOR拮抗剂组与各组,HI+rh-EPO组与各组,HI+EPOR拮抗剂+rh-EPO组与Sham组,HI+EPOR拮抗剂+rh-EPO组与HI+EPOR拮抗剂组间,有统计学差异(P0.05)。Ang-1 mRNA,分组处理后2、4天,HI组与Sham组,HI+EPOR拮抗剂组与HI组,HI+rh-EPO组与各组,HI+EPOR拮抗剂+rh-EPO组与HI+EPOR拮抗剂组间,有统计学差异(P0.05)。结论:3日龄未成熟新生大鼠缺血缺氧后脑损伤符合早产儿缺血缺氧脑白质损伤的神经病理学改变。在早产儿脑白质损伤模型鼠中EPOR被阻断后,影响重组人促红细胞生成素通过ERK信号通路调节脑白质损伤后脑白质部位的CD34、VEGF、Ang-1和VEGFR2的表达。
【图文】：

颈总动脉,前囟点,吸入麻醉,异氟烷

图 1：右侧颈总动脉游离并结扎图 2：混合气体通入在缺氧容器中进行缺氧处理1.2.1.3 立体定位试注射美蓝观察缺血缺氧术后，异氟烷吸入麻醉后，固定于脑立体定位仪上, 75% 医用酒精皮肤消毒 ,作一切口暴露前囟点 ,立体定位于右侧脑室 (坐标 :前囟点后 1.0mm, 侧 1.0mm,深 2.5mm), 经幼鼠脑定位仪将美蓝经微量注射器缓慢入脑内持续约 5 分钟，然后留针1-2 分钟缓慢拔出。缝合切口，再次消毒缝合切口。术后 2 小时，异氟烷吸入麻醉后冰上断头取脑，游离出幼鼠右侧大半球观察注射的情况。见图 3、4。

混合气体,容器,前囟点,吸入麻醉

图 1：右侧颈总动脉游离并结扎图 2：混合气体通入在缺氧容器中进行缺氧处理1.2.1.3 立体定位试注射美蓝观察缺血缺氧术后，异氟烷吸入麻醉后，固定于脑立体定位仪上, 75% 医用酒精皮肤消毒 ,作一切口暴露前囟点 ,立体定位于右侧脑室 (坐标 :前囟点后 1.0mm, 侧 1.0mm,深 2.5mm), 经幼鼠脑定位仪将美蓝经微量注射器缓慢入脑内持续约 5 分钟，，然后留针1-2 分钟缓慢拔出。缝合切口，再次消毒缝合切口。术后 2 小时，异氟烷吸入麻醉后冰上断头取脑，游离出幼鼠右侧大半球观察注射的情况。见图 3、4。
【学位授予单位】：东南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R-332;R722.6

【参考文献】