β-1,3-半乳糖基转移酶2基因敲除对老年小鼠海马神经炎症的影响

发布时间：2020-05-31 05:28

【摘要】：目的糖基转移酶是神经发育过程中的较为重要的一类酶,并且逐渐成为研究热点,β-1,3-半乳糖基转移酶2(β-1,3-galactosyltransferase 2,B3galt2)属于β-1,3-半乳糖基转移酶家族,是糖基转移酶中的主要类型之一。通过探究β-1,3-半乳糖基转移酶2基因敲除对由衰老引起的海马神经炎症的影响,进而阐明B3galt2基因在老年小鼠的海马中对神经炎症的调控作用,从而为进一步研究B3galt2及其它糖基转移酶在中枢神经系统中的作用提供理论依据。方法应用B3galt2基因敲除杂合子小鼠繁育并通过PCR基因型鉴定的方法获得来自同一窝、相同性别的12个月野生型、杂合子和纯合子小鼠,应用免疫组织化学染色法和蛋白印迹法观察海马区小胶质细胞和相关炎症因子IL-1β和TNFα的变化。通过免疫荧光染色法观察衰老小鼠海马区域Aβ淀粉蛋白和MAP2的表达变化。结果1、通过B3galt2基因敲除小鼠杂合子的合笼繁育,成功获得来自同一窝及相同性别的野生型、杂合子和纯合子小鼠。2、B3galt2基因敲除会降低衰老小鼠海马区域IL-1β和TNF-α等炎症因子的表达水平。3、B3galt2基因敲除会导致衰老小鼠海马区域活化的小胶质细胞数量下降。4、B3galt2基因敲除增加衰老小鼠海马区域Aβ淀粉蛋白的沉积。5、B3galt2基因敲除导致衰老小鼠海马区域树突相关蛋白MAP2的表达降低。结论1、B3galt2基因敲除后减弱衰老小鼠海马区域的神经炎症反应。2、B3galt2基因敲除后小胶质细胞活化减少、Aβ淀粉蛋白沉积增多,MAP2蛋白表达减少。3、B3galt2基因敲除后可能减弱对衰老小鼠海马区域的神经保护作用。
【图文】：

条带,基因型鉴定,小鼠,基因敲除

85%乙醇1min，95%乙醇1min（2次），无水乙醇1min（2次），二甲苯1min（2次），中性树胶封片，显微镜观察分析。6、统计学分析所有实验至少独立重复三次。数据表示为Means ± STDEV。统计学分析采用SPSS23.0建立数据库。免疫组织化学以及蛋白印迹实验数据分析均采用单因素方差分析（One-way ANOVA）。P<0.05时差异有统计学意义。结果一、B3galt2 基因敲除小鼠 PCR 基因型鉴定为了获得 B3galt2 基因敲除纯合子小鼠，我们利用 B3galt2 基因敲除杂合子小鼠进行繁育，剪取 1cm 左右出生 1 个月的小鼠尾部组织，，利用 PCR 基因型鉴定的方法对新生的小鼠进行基因型鉴定，鉴定结果如图 1 所示，野生型在 107bp处表达，纯合子在 403bp 处表达，杂合子同时在 107bp 和 403bp 处表达。

HE染色,海马,基因杂合子,情况

二、老年小鼠海马区域 HE 染色结果HE 染色是观察组织细胞结构与病理变化最直接有效的方法，我们通过对不同基因型的老年小鼠海马部位进行 HE 染色，结果发现 B3galt2 基因纯合子、B3galt2基因杂合子和野生型的老年小鼠 HE 切片无明显区别，细胞排列均整齐，细胞间距适中，未见有明显的细胞水肿、变性和坏死等情况。
【学位授予单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R741;R-332

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