分别下调MRPL35、RasGRF2对大肠癌裸鼠移植瘤模型肿瘤生长和转移的影响

发布时间：2020-06-15 17:34

【摘要】：目的:通过RNA干扰技术,研究线粒体核糖体大亚基蛋白35(MRPL35)和Ras蛋白特异性的鸟苷酸释放因子2(RasGRF2)基因对结直肠癌裸鼠移植瘤模型在肿瘤生长和肿瘤转移方面的影响。方法:构建沉默MRPL35基因慢病毒颗粒,感染HCT116大肠癌细胞,筛选稳定敲低MRPL35的细胞克隆。将处于对数生长期的细胞接种于BALB/c裸鼠皮下,建立皮下移植瘤模型。观察肿瘤生长情况、绘制肿瘤生长曲线;Real-Time PCR检测皮下移植瘤中MRPL35 mRNA的表达水平,免疫组化检测Ki-67和Cleaved caspase-3在肿瘤组织的表达;t-test分析移植瘤体积的差别。构建沉默RasGRF2基因慢病毒颗粒,感染HCT116大肠癌细胞,筛选稳定敲低RasGRF2的细胞克隆。将处于对数生长期的细胞经尾静脉注射入BALB/c裸鼠,建立肺转移肿瘤模型。观察各组裸鼠的呼吸、体重、活动、精神等身体状态;取裸鼠肺组织,解剖显微镜下观察裸鼠肺转移情况,并计数转移瘤结节;IHC法检测肺转移瘤的RasGRF2、MMP9的表达情况;Kaplan-Meier法分析敲低RasGRF2与裸鼠生存率的关系。结果:成功构建了结直肠癌皮下移植瘤模型,在成瘤后3周内,实验组与对照组相比,肿瘤体积较小,差别有统计学意义(P0.05);Real-Time PCR结果显示实验组肿瘤较对照组MRPL35表达减少(P0.05);Ki-67、Cleaved caspase-3的免疫组化结果显示,与对照组相比,敲减MRPL35基因后,Ki-67表达减少72%、Cleaved caspase-3表达增加61%。经尾静脉肺转移模型中,建模8周后,观察裸鼠出现明显消瘦、弓背、精神萎靡等现象。实验组裸鼠肺转移瘤数目少于对照组,差别有统计学意义(P0.05);免疫组化染色发现实验组肿瘤组织中表达RasGRF2、MMP9较对照组少;Kaplan-Meier生存分析显示敲减RasGRF2裸鼠生存率明显高于对照组(P0.05)。结论:在动物水平敲减MRPL35可以抑制结直肠癌的增殖;在动物水平敲减RasGRF2基因可以抑制结直肠癌的转移。
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R-332;R735.34

【参考文献】