小鼠肝脏γδT细胞肝内发育过程的初步探究

发布时间：2020-06-17 05:02

【摘要】：目的肝脏是一个天然免疫占优势的免疫器官,其中包括NKT细胞、NK细胞、表达γδTCR 链的γδT 细胞和粘膜相关invariant T(mucosal-associated invariant T,MAIT)细胞。肝脏γδT细胞比例明显高于脾脏、淋巴结和外周血。许多研究表明,γδT细胞存在胸腺外发育途径,小肠是其发育场所之一,我们实验室的前期研究也初步证实肝脏有可能是γδT细胞胸腺外发育的场所,那么γδT细胞在肝脏内是如何发育分化的,与其在胸腺中的发育分化有何不同,尚不清楚。在小鼠个体发育过程中,胚胎肝脏是造血干细胞(HSCs)增殖和分化的主要场所,其含有大量的造血干细胞和造血前体细胞。出生后,造血位点转移至骨髓,但是有多个研究显示,小鼠成年后肝脏中依然残留有少量造血干细胞并且具有自我更新和长期造血造血重建功能。近年来有研究发现成年肝脏中存在一群特有的造血干细胞Lineage-Mac-1+Sca-1+(LMS)细胞。通过移植转输实验发现,其来源于胚胎肝脏造血并且能在肝内发育形成肝脏驻留NK细胞(LrNKs)。那肝脏特有LMS细胞能否在肝脏中发育分化成γδT细胞?肝脏γδT细胞是否存在独特的肝内发育过程?这些问题尚无确切研究。为了探讨上述问题,本课题从以下几个方面对肝脏γδT细胞肝内发育过程进行了初步探究。首先,我们通过检测肝脏、脾脏、胸腺以及小肠上皮内淋巴细胞(IELs)中γδT前体细胞的比例和表型发现肝脏γδT前体细胞比例相对较高,且具有独特的表型特征。其次,通过体内过继转输实验和体外共培养实验从体内体外验证了肝脏γδT细胞前体细胞具有发育分化为成熟γδT细胞的能力。最后,我们通过过继转输胚胎期、新生期和成年期等不同时期肝脏特有造血干细胞LMS细胞,发现其均可以在肝脏中重建出γδT细胞,重建的γδT细胞具有独特的转录因子表达和Vγ亚型,分泌的细胞因子以IFN-γ为主。初步揭示了肝脏γδT细胞独特的肝内发育过程。方法1.分离成年小鼠肝脏、胸腺、脾脏和小肠单个核细胞,流式细胞术检测其中γδT细胞和CD24+CD73+γδT细胞前体细胞的比例及其表型。2.分选成年小鼠肝脏和胸腺γδT前体细胞与OP9-DL1共培养,体外观察肝脏或胸腺来源的γδT前体细胞向成熟γδT细胞发育分化的能力。3.分选CD45.1来源的成年小鼠肝脏和胸腺γδT前体细胞过继转输至半致死量照射(5Gy)的TCRδ-δ+鼠中,体内观察肝脏或胸腺来源的γδT前体细胞向成熟γδT细胞发育分化的能力。4.流式细胞术检测E16.5天小鼠、新生小鼠以及成年小鼠肝脏和胸腺组织中Lin-Mac-1+Sca-1+的表达情况。5.分选CD45.1背景的E16.5天、新生时期以及成年时期等不同时期肝脏和胸腺Lineage-(Lin-)细胞或LMS细胞过继转输至半致死量照射(5Gy)的TCRδ-δ-鼠中,体内观察其向γδT细胞发育的情况、细胞因子分泌的情况以及转录因子表达和Vγ亚型的情况。结果1.成年小鼠肝脏γδT细胞和CD24+CD73+γδT细胞前体细胞比例显著高于胸腺和脾脏。并且肝脏γδT细胞前体细胞表型特点是高表达CD44、低表达CD27;而脾脏和胸腺的CD24+CD73+yδT细胞前体细胞高表达CD27,CD44的表达为中低水平。2.成年小鼠肝脏CD24+CD73-γδT细胞前祖细胞和CD24+CD73++γδT细胞前体细胞通过与OP9-DL1细胞共培养可以分化为成熟的γδT细胞且具有分泌细胞因子的能力。肝脏成熟γδT细胞分泌IL-17水平高于IFN-y,胸腺成熟γδT细胞分泌的细胞因子以IFN-γ为主。3.成年小鼠肝脏CD24+CD73+γδT细胞前体细胞过继转输至TCRδ-/-鼠中,可以发育分化为成熟的yδT细胞。4.胚胎肝脏来源的单个核细胞能在各个组织中重建出γδT细胞,并且重建的γδT细胞优势分泌细胞因子IFN-γ;胸腺来源的单个核细胞重建的yδT细胞优势分泌细胞因子IL-17A。5.体内转输实验结果表明,新生期和成年期小鼠肝脏来源的Lineage-细胞均可以在肝脏中重建出γδT细胞,并且在各组织中重建的γδT细胞几乎全部为分泌IFN-y的γδT1细胞。6.胚胎期、新生期和成年期小鼠肝脏中均有LMS细胞,并且随年龄的增长比例逐渐降低,而胸腺在发育的各个阶段均不存在LMS细胞。7.体内转输实验结果表明,胚胎期、新生期和成年期小鼠肝脏来源的LMS细胞均可以在肝脏中重建出γδT细胞,并且在各组织中重建的γδT细胞几乎全部为分泌IFN-γ的γδT1细胞,表达转录因子T-bet且主要是Vγ1+γδT细胞。结论1.相比于胸腺、脾脏和小肠,肝脏含有较高比例的γδT细胞前体细胞,且这些前体细胞具有独特的表型和功能特点。2.体外和体内实验验证了成年小鼠肝脏CD24+CD73-δT细胞前祖细胞和CD24+CD73+γδT细胞前体细胞均可以发育分化为成熟的γδT细胞。3.不同时期肝脏特有LMS细胞均可以在肝脏中重建出γδT细胞。重建的γδT细胞主要是Vγ1+γδT细胞,分泌的细胞因子主要是IFN-y,并且T-bet的表达高于RORγt。肝脏γ5T细胞存在独特的肝内发育过程。
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R392
【图文】：

有利的支持。逡逑根据ＣＤ２７的表达可以将ＹＳＴ细胞分为ＣＤ２Ｔ分泌ＩＬ－１７的ＹＳＴ１７细胞和逡逑ＣＤ２７＋分泌ＩＦＮ－丫的丫５Ｔ１细胞［３８－４０］（图３）。通过将其他亚群与幼稚型和记忆逡逑型ＣＤ８＋邋ａｐＴ细胞进行比较，我们发现ＣＤ２７＋Ｙ５Ｔ细胞包括幼稚型和记忆型淋巴逡逑细胞，它们与适应性ａＰＴ细胞具有许多相似的表型和功能特征，而幼稚性Ｙ５Ｔ逡逑细胞的表型尚需进一步的确定［４１］。逡逑１６逡逑

逦山东大学硕士学位论文逦逡逑赖于ＴＣＲ信号的强弱。早期的研究表明，强的ＴＣＲ信号将导致ＥＰＫ－ＭＡＰＫ通逡逑路的激活，从而诱导转录因子－早期生长反应因子（ＥＧＲ１，邋ＥＧＲ３）以及ＤＮＡ结逡逑合抑制剂３邋（Ｉｄ３）的高表达，Ｉｄ３是ＥＧＲ的转录靶点。Ｉｄ蛋白是一种螺旋－环－逡逑螺旋蛋白Ｅ２Ａ的直接抑制剂，在胸腺细胞发育的关键节点发挥重要的调节作用，逡逑信号强度假说表明，Ｉｄ３的积累越高，其抑制Ｅ２Ａ的作用越强，从而使胸腺细胞逡逑向ｙ５Ｔ细胞谱系分化［５２］。相反地，ＴＣＲ信号越弱，通过Ｎｏｔｃｈ受体和ｐｒｅ－ＴＣＲ逡逑传递地信号就越弱，ｌｄ３的积累就越少，因此对Ｅ２Ａ的抑制作用就越弱，从而导逡逑致胸腺细胞向ａＰＴ谱系分化［５３］。也有研究表明，胸腺细胞谱系的选择还取决于逡逑ＴＣＲ与配体结合的强度，在ＴＣＲ与较弱的配体Ｔ１０相互作用后，胸腺细胞大多逡逑数向ａ｜３Ｔ谱系分化，而与较强的配体Ｔ２２结合后，成熟的ＣＤ２４ｌ°ＣＤ７３ｈｌｙ５Ｔ细胞逡逑比例更高［５４］。因此，信号强度的差异通过调节谱系特异性转录因子决定了胸腺逡逑细胞向ａＰＴ和ｙＳＴ谱系的选择（图６）。逡逑ａｐ邋Ｔ邋ｃｅｌｌ邋ｌｉｎｅａｇｅ逦ｙ６Ｔ邋ｃｅｌｌ邋ｌｉｎｅａｇｅ逡逑ｌ逦Ｉ逦Ｉ

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 高凤鸣;李新兰;王文惠;刘洪祥;;应用荧光细胞分选仪研究白血病的细胞周期[J];解剖学报;1987年02期

2 茹秀菁;席雨人;;NK细胞与血液病[J];国外医学.输血及血液学分册;1988年02期

3 Pierre Golstein;倪春辉;;细胞溶解性T细胞的溶解机制[J];国外医学(免疫学分册);1988年06期

4 朱剑虹;杜子威;黄强;覃文新;王尧;韦永新;徐庚达;杨伟廉;;抗人脑胶质瘤单克隆抗体导向药物的选择性细胞毒作用[J];苏州医学院学报;1988年04期

5 李鼎九;热疗与化疗——热疗讲座(3)[J];中国放射肿瘤学;1989年02期

6 郑永唐,贲昆龙,郑武飞;人T细胞分化抗原的研究进展[J];国外医学(免疫学分册);1989年02期

7 任连生;徐建国;马俊英;周培华;;活血化瘀类中药水提液对HL-60的细胞毒作用[J];山西中医;1989年05期

8 方政,史玉坤,黄为群,杨凤岩,姚义刚;马来丝虫幼虫经细胞毒作用后氨基酸的变化[J];中华传染病杂志;2001年05期

9 林胜利;17-AAG特异的细胞毒作用[J];生理科学进展;2004年02期

10 区文超,朱俏萍,黄晓川,郑燕烈,王晓光;雌激素减弱氧化低密度脂蛋白的细胞毒作用[J];中华老年医学杂志;2000年01期

相关会议论文 前10条

1 张凤蕴;樊拥军;陈君平;张飚;王丽群;;3种T细胞系细胞毒作用的比较[A];庆祝黑龙江省免疫学会成立十周年（1993—2003）论文集[C];2003年

2 项光亚;杨瑜;阮金兰;周宜开;;金丝桃细胞毒作用和抗肿瘤作用的实验研究[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年

3 徐晓军;宋德刚;Mathilde Poussi;汤永民;Danie1 J.Powell Jr.;;利用外源性细胞因子优化嵌合抗原受体修饰的T细胞抗肿瘤作用的研究[A];浙江省免疫学会第十次学术大会论文集[C];2016年

4 赵春红;侯明;李小芳;张峰;王琳;彭军;;细胞毒作用在ITP发病及地塞米松治疗中的意义研究[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年

5 周强;程浩;朱可建;;细胞内谷胱甘肽含量对二甲基延胡索酸诱导的细胞毒作用调节机制的初探[A];2009年浙江省皮肤病学术会议论文汇编[C];2009年

6 梁赤周;马志章;丁鸣;杨帆;丁仁瑞;;γTNF-β与TNF-β对L929细胞的细胞毒作用及其信号转导的初步研究[A];第七届全国肿瘤生物治疗学术会议论文集[C];2001年

7 朱小辉;郝鹏;柳世庆;张培;邱晓彦;;癌细胞内Ig基因的表达调控有别于B淋巴细胞[A];第八届全国肿瘤生物治疗学术会议论文集[C];2004年

8 黄国伟;康静;张文治;张莉;俞鸣;梅玫;董亚利;;铝对体外人胚大脑神经细胞毒作用的研究[A];中国营养学会第六届微量元素营养学术会议论文摘要汇编[C];1999年

9 马玉彦;王波;蔡莉;李殿俊;;IL-2与化疗药物合用对B16黑色素瘤的细胞毒作用[A];庆祝黑龙江省免疫学会成立十周年（1993—2003）论文集[C];2003年

10 靳辉;王唯析;杨蓬勃;;[Gly14]-Humanin的基因克隆及序列测定[A];全面建设小康社会：中国科技工作者的历史责任——中国科协2003年学术年会论文集（下）[C];2003年

相关重要报纸文章 前2条

1 丰俊东；徐晓玉;中药对肿瘤细胞MDR的逆转作用[N];中国医药报;2005年

2 凯莱英医药集团;慢性淋巴细胞白血病治疗药物浅析[N];中国医药报;2019年

相关博士学位论文 前10条

1 韩颖;Cereblon在T细胞稳态及活化调节中的作用及其机制研究[D];天津医科大学;2015年

2 巴音达拉;KIR分子在泡球蚴感染所致肝脏区域NK细胞功能异常的机制研究[D];新疆医科大学;2019年

3 刘炎;Grp75细胞保护效应的机制研究[D];复旦大学;2003年

4 邵泽勇;超声波逆转肿瘤细胞多药耐药的体外实验研究[D];重庆医科大学;2004年

5 王钦红;细胞周期G1期调控分子在白血病细胞、淋巴瘤细胞以及CD34～+细胞增殖、分化、凋亡中的作用[D];复旦大学;2004年

6 张艰;姜黄素诱导肺癌细胞脱落凋亡的作用及机理研究[D];第四军医大学;2005年

7 龚巍;调节性T细胞和胃癌的临床与实验研究[D];苏州大学;2005年

8 李秋;水疱口炎病毒联合吉西他滨治疗肺癌的实验研究[D];四川大学;2004年

9 孙新臣;细胞周期调控剂增强X-射线对肿瘤细胞的杀伤作用及其机制研究[D];中国协和医科大学;2002年

10 曹震宇;核内巨噬细胞集落刺激因子作用研究[D];中国协和医科大学;2003年

相关硕士学位论文 前10条

1 任秀敏;绿原酸对K562/ADM细胞多药耐药的影响及机制研究[D];滨州医学院;2018年

2 方可可;小鼠肝脏γδT细胞肝内发育过程的初步探究[D];山东大学;2019年

3 杨彩虹;二氢青蒿素对人胃癌MKN-45细胞的抑制作用及机制研究[D];昆明医科大学;2018年

4 张立;反应氧族介导K562肿瘤细胞形成多药耐药及机制研究[D];河南大学;2018年

5 陈洁汝;RNA干扰Apollon基因联合中药知母皂苷A-Ⅲ对K562/ADM细胞多药耐药的影响及其分子机制的研究[D];滨州医学院;2017年

6 王红;靶向沉默HOXB4基因逆转PI3K/Akt通路介导的K562/ADM细胞多药耐药的研究[D];滨州医学院;2017年

7 马路园;NKG2家族介导NK细胞活性在乙丙型肝炎病毒感染中的作用[D];河北医科大学;2018年

8 王海燕;非共平面多氯联苯对哺乳动物细胞诱发微核和细胞周期阻滞的作用[D];南方医科大学;2017年

9 蔡朝辉;DC-CIK逆转卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP多药耐药的研究[D];河北医科大学;2017年

10 陈yN平;Epinodosin对人早幼粒白血病细胞HL-60生长抑制、分化诱导及细胞骨架的影响[D];西北师范大学;2015年

本文编号：2717113