SIRT1靶向调控GR抗产褥期抑郁的机制研究

发布时间：2020-06-21 00:26

【摘要】：目的:寻求有效、稳定的产褥期抑郁模型的构建方法,探究糖皮质激素受体(GR)在产褥期抑郁发病中的作用;并进一步验证SIRT1能否通过靶向调控GR改善产褥期抑郁的症状。方法:(1)通过两种方式构建产褥期抑郁模型:(1)产后第1至第21天CORT(Corticosterone)注射诱导产褥期抑郁药理学应激模型;(2)去势手术+雌激素撤退(激素撤退法)构建产褥期抑郁模型,对比抑郁相关的行为学实验结果,寻找最为有效、稳定的产褥期抑郁模型的构建方法。(2)以雌激素撤退构建的产褥期抑郁模型鼠为研究对象,海马脑区埋套管、微注射GR抑制剂RU486,通过行为学实验、分子生物学实验验证GR(Glucocorticoid receptor)是否为产褥期抑郁的潜在调控靶点。(3)HEK293T细胞系脂质体转染法过表达SIRT1和GR质粒,Co-IP技术验证SIRT1与GR是否存在直接的相互作用,评价SIRT1过表达能否诱导GR转录及翻译水平上调。(4)以雌激素撤退构建的产褥期抑郁模型大鼠为研究对象,海马脑区埋套管、微注射SIRT1激动剂SRT2104,行为学实验验证活化SIRT1能否拮抗产褥期抑郁的症状,分子生物学实验明确SIRT1是否通过调控GR发挥的抗产褥期抑郁的作用。结果:(1)与对照组相比,CORT注射组大鼠在强迫游泳实验和悬尾实验中的静止不动时间无显著差异,该方法无法有效诱导产褥期抑郁模型;而激素撤退法构建的产褥期抑郁模型鼠在强迫游泳实验和悬尾实验中静止不动时间较对照组显著增加,可以有效诱导抑郁模型。(2)旷场实验和高架十字迷宫实验结果显示:激素撤退法构建的产褥期抑郁模型鼠存在焦虑样情绪,其海马组织GR表达量显著降低,SIRT1表达量无明显改变;大鼠微注射GR抑制剂-RU486表现为焦虑样情绪(旷场实验和高架十字迷宫实验)及抑郁样情绪(强迫游泳实验和悬尾实验),上述行为学表现伴随着海马组织GR表达量显著降低,SIRT1表达量无明显改变。(3)Co-IP结果显示GR和SIRT1之间存在直接的联系,RT-qPCR及Western blot结果显示SIRT1增加GR的转录及表达,而GR却无法增加SIRT1的转录及表达,即SIRT1靶向调控GR参与了产褥期抑郁的调控。(4)糖水偏好实验、强迫游泳实验和悬尾实验结果显示:微注射SIRT1激动剂-SRT2104能够明显降低大鼠抑郁样行为,并伴随海马脑区GR和SIRT1表达上调;然而旷场实验和高架十字迷宫实验结果表明SIRT1活化剂无法改善产褥期抑郁大鼠焦虑样情绪。结论:(1)去势手术+雌激素撤退(激素撤退法)构建的产褥期抑郁模型能够有效模拟大鼠产褥期抑郁和焦虑样症状,GR为产褥期抑郁的潜在调控靶点(2)SIRT1通过靶向调控GR可以有效缓解产褥期抑郁样行为,而对焦虑情绪无明显改善作用。
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R749.4;R-332;R714.6
【图文】：

埋置,套管,皮下注射,微注射

图3.1大鼠脑区套管埋置手术Figure 3.1 The surgery for osmotic pump3.2.3实验分组实验分为三组，即：①HSP 组（激素模拟妊娠组）：苯甲酸雌二醇（EB） 2.5ug + 孕激素（P4）4 mg 皮下注射 16 天，EB 50 ug 皮下注射 12 天。②HSP-RU486组（激素模拟妊娠并微注射 GR 抑制剂组）：EB 2.5 ug + P4 4 mg 皮下注射 16天，EB 50 ug 皮下注射 12 天。于 24-28 天通过预先埋置的套管向双侧海马微注射糖皮质激素受体抑制剂 RU486。③EW 组（雌激素撤退组）：EB2.5 ug + P4 4 mg皮下注射 16 天，EB 50 ug 皮下注射 7 天。3.2.4模型建立及给药方式

实验证明,蛋白,过表达,质粒

江苏大学硕士学位论文39图4.1 Co-IP实验证明SIRT1与GR蛋白之间存在直接联系Figure 4.1 Co-IPexperiment demonstrates GR and SIRT1 physically interact with eachother.SIRT1可以增强GR转录活性向 6 孔板中 HEK-293T 细胞 2 孔转染 3 ug GR-Flag 过表达质粒，2 孔转染 3ug SIRT1-HA 过表达质粒,剩余 2 孔转染对照质粒。转染 24h 后，收集细胞提取RNA。结果显示向细胞转染 SIRT1 过表达质粒后，细胞内 GR 转录水平增高，而向细胞转染 GR 过表达质粒后，细胞内 SIRT1 转录水平无明显变化。4.3.2图4.2 RT-qPCR实验证明SIRT1可以增强GR转录。Figure 4.2 RT-q PCR experiment proved that SIRT1 could enhanc GR transcription al level

【参考文献】